JoVE Encyclopedia of Experiments
Mikrobiyoloji
0 görüntüleme • 2:47 dk • September 26th, 2025
Sürü hareketliliğini destekleyen bir kaynayan agar plakası alın - dal benzeri desenler oluşturan yarı katı bir yüzey boyunca koordineli bir bakteri hareketi.
Plakanın merkezini bir Pseudomonas aeruginosa kültürü ile aşılayın ve aynı kültürün bir karışımını bir antibiyotikle eşit aralıklı uydu konumlarına yerleştirin.
Işık yansımalarını en aza indirmek için plakayı siyah boyalı bir kapakla kapatın.
Plakayı, optimum nemde tutulan bir inkübatörün içindeki düz yataklı bir tarayıcıya yerleştirin.
Kuluçka sırasında, merkezi popülasyon çoğalmaya ve sürü oluşturmaya başlar.
Sürü, antibiyotik uygulanan kolonilere yaklaştıkça bakterilerin salgıladığı stres sinyallerini algılar ve bu bölgelerden kaçınmak için yönlendirir.
Otomatik yazılım tarafından kontrol edilen tarayıcı, düzenli aralıklarla yüksek çözünürlüklü görüntüler yakalar.
Sürünün ilerlemesini ve zaman içindeki kaçınmasını görselleştirmek için bu görüntüleri bir videoda derleyin.
Geç aşamadaki bir görüntüde her uydu kolonisinden merkezi sürünün kenarına olan mesafeyi ölçerek sürüden kaçınmayı ölçün.
Plakaları tarayıcıya yerleştirdikten sonra, görüntülerin kaydetme yolunu ayarlamak için dosyayı açın ve ayarları kaydedin ve 30 dakikalık aralıklarla tara ve Tamam'a tıklayın. Görüntü alımını otomatikleştirmek için komut dosyası yazılımını kullanın.
Hem boşta taramayı hem de tek taramayı seçin ve boşta taramaya sağ tıklayın, ardından etkin'e sol tıklayın. İnkübasyonun sonunda, taranan tüm görüntüleri ImageJ'ye aktarın. Sıra seçenekleri penceresinde, görüntü sayısı seçilen görüntü sayısını gösterecektir.
Klasördeki ilk resimden başlamak için görüntüyü birden başlatın ve görüntülerin orijinal boyutunu korumak için görüntüleri% 100'de ölçeklendirin. Görüntüleri renkli tutmak için RGB'ye dönüştür'e tıklayın. Sanal yığını kullan seçeneğini işaretsiz bırakın ve görüntüleri yüklemek için Tamam'a tıklayın.
Görüntüleri bir AVI dosyasında birleştirmek için dosya, farklı kaydet ve AVI'ye tıklayın. Sıkıştırmayı JPEG olarak ve kare hızını saniyede beş kareye ayarlayın. Ardından AVI hızlandırılmış çekimini uygun depolama klasörüne kaydedin.