Vibrio parahaemolyticus'un Sürü Hücrelerine Farklılaşmasının İndüksiyonu

JoVE Encyclopedia of Experiments

Mikrobiyoloji

0 görüntüleme • 3:55 dk • September 26th, 2025

Bakteri üremesini destekleyen erimiş agar ortamıyla başlayın.


Serbest demiri tüketmek için bir demir şelatörü ekleyin ve ortamı kalsiyumla destekleyin.


Ortamı bir tabağa dökün, katılaşmasına izin verin ve ardından kalan nemi gidermek için kurutun.


Kamçılı bir bakteri olan Vibrio parahaemolyticus'un et suyu kültürünü alın.


Sıvı ortamda, bakteriler kamçılı kısa, çubuk şeklinde bir yüzücü formunda bulunur.


Kültürü plakaya yerleştirin ve yüzeyle bakteri temasını teşvik etmek için kurumasını bekleyin.


Çanağı kapatın ve inkübe ederek bakterilerden gelen uçucu metabolik yan ürünlerin birikmesine izin verin.


Yüzey teması, demir sınırlaması, kalsiyum mevcudiyeti ve birikmiş yan ürünler, lateral flagella içeren uzun sürü hücrelerine farklılaşmayı tetikleyen ve katı yüzeyler boyunca hareketi sağlayan gen ekspresyonunu indükler.


Sürü hücreleri dışa doğru genişler ve tamamen farklılaşmış hücrelerden oluşan sürü parlamaları oluşturur, bu da başarılı farklılaşmayı gösterir.


Kaynaşma plakaları yapmak için agar çözeltisini hazırlamak için, dört gram kalp infüzyonu veya H. I. agar tozu ve 100 mililitre çift damıtılmış su süspanse edin.


H. I. agar çözeltisini bir mikrodalga fırında dikkatlice kaynatın, toz eriyene kadar şişeyi zaman zaman sallayın. Agar çözeltisini 121 santigrat derecede 20 dakika otoklavlayın, agar çözeltisini sürekli karıştırarak 60 ila 65 santigrat dereceye soğutun. Bir sonraki adım, oldukça toksik olan 2, 2'-Bipiridil'in işlenmesini içerir, bu nedenle eldiven ve koruyucu gözlük takılmalıdır.


50 mikromolar nihai konsantrasyona 2, 2'-Bipiridil ekleyin. Dört milimolar nihai konsantrasyona kalsiyum klorür ekleyin. Az miktarda V. parahaemolyticus hücresini tek bir koloninin kenarından 5 mililitre LB suyuna aşılayın.


Kültürü, 600 nanometre 0.8'lik bir optik yoğunluğa ulaşana kadar bir çalkalayıcı inkübatörde 37 santigrat derecede inkübe edin. Bu genellikle yaklaşık iki ila üç saat sürer. Hücre kültürü büyürken, nihai H. I. agar çözeltisinin 30 ila 35 mililitresini yuvarlak 150 milimetrelik bir petri kabına pipetleyin ve agarın katılaşmasına izin verin.


Hücre kültürünü tespit etmeden hemen önce, agar plakasını açık bir kapakla 37 santigrat derecede en az 10 dakika veya herhangi bir sıvı kalıntısı kaybolana kadar dik olarak kurutun, ancak artık değil. H. I. agar kaynaşma plakasının ortasına bir mikrolitre hücre kültürü yerleştirin ve lekenin kurumasını bekleyin. Plakayı şeffaf plastik bantla kapatın, bantta hava kabarcıkları ve kıvrımlar oluşmasını önlemeye dikkat edin.


Plakayı gece boyunca 24 santigrat derecede inkübe edin. Bu, bu hızlandırılmış video klipte gösterildiği gibi, koloninin merkezinden uzanan sürü parlamaları ile bir V. parahaemolyticus sürü kolonisinin oluşmasıyla sonuçlanacaktır.
 

06:26

Bakteriyel Sürülerin Hızlandırılmış Görüntülemesi ve Kolektif Stres Tepkisi

İlgili videolar

0 Görüntüler

07:59

Bir Seride Üç Yerleşik Teknik Uygulayarak Escherichia coli'de Flagella Odaklı Hareketliliği Araştırmak

İlgili videolar

0 Görüntüler

05:57

İndükleyici Gradyan Plakaları Üzerindeki Bakteriyel Yüzey Kaynatma Motilitesinin Ölçülmesi

İlgili videolar

0 Görüntüler

03:44

Vibrio parahaemolyticus Swarmer Hücrelerinin Görüntüleme İçin Hazırlanması

İlgili videolar

0 Görüntüler

02:24

Vibrio Türlerinin Hızlı Tespiti için Yeni Bir Kromojenik Ortam

İlgili videolar

0 Görüntüler

02:08

Gradyan İnhibitör Plakası Kullanarak Bakteri Sürüsünün Değerlendirilmesi

İlgili videolar

0 Görüntüler

07:35

Bakteriyel Yüzey Motilite Tahliller hazırlanması, Görüntüleme ve miktarının belirlenmesi

İlgili videolar

0 Görüntüler

08:02

Senkronizasyon

İlgili videolar

0 Görüntüler

09:34

Tespiti için daha duyarlı ve özgül Chromogenic Agar Orta Gelişimi

İlgili videolar

0 Görüntüler

07:58

Biyotiplerin Bakımında ve Türevinde Kullanılan Laboratuvar Teknikleri

İlgili videolar

0 Görüntüler

Son güncelleme: 22 Ağustos 2026