$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Floresan yaymak için genetiği değiştirilmiş, hapsolmuş bakteri kolonileri içeren, ışıkla parçalanabilen bir hidrojel tabakasına sahip bir lamel alın.
Lameli bir tutucuya yerleştirin.
Numunenin dehidrasyonunu önlemek için ortam ekleyin.
Parlak alan mikroskobu altında, ilgilenilen tek bir koloniye odaklanın.
Uygun yazılımı kullanarak, hidrojelin yapısal bağlarını parçalamak ve hücrelere UV maruziyetini en aza indirmek için koloni çevresinde hücre ekstraksiyonu için bir ışık modeli tasarlayın.
UV ışık yoğunluğunu ve maruz kalma süresini ayarlayın.
Hedef koloninin salınmasını kolaylaştıran açıkta kalan alanlarda hidrojeldeki yapısal bağları kırmak için UV ışığına maruz kalmayı başlatın.
Bir floresan filtresi kullanarak koloniyi tanımlayın.
Diğer ucu bir şırıngaya bağlı olacak şekilde noktaya bir boru ucu yerleştirin.
Parlak alan moduna geçin ve şırıngayı kullanarak serbest bırakılan koloniyi aspire edin.
Daha fazla analiz için koloniyi bir tüpe aktarın.
Numuneyi bir PDMS tutucuya yerleştirin ve numunenin dehidrasyonunu önlemek ve serbest bırakılan hücreler için bir taşıyıcı çözelti sağlamak için tanımlanan ortamı numunenin üzerine ekleyin. Kalibrasyon aynasını yerine getirdikten sonra, hidrojel veya mikrokuyu dizisi içindeki kolonilerin keskin bir görüntüsünü elde etmek için mikroskop odağını ayarlayın ve ilgilenilen kolonileri veya kuyuları belirlemek için inceleyin.
Burada, hücre ekstraksiyonu için farklı desenleri test etmek ve tanımlanan deseni kaydetmek için kamera görünümü numune içindeki kolonileri gösterirken ışık desenlerini tasarlayın. Ardından oturum kontrolü bölümünü seçin, kaydedilen diziyi desenli aydınlatma aracı ürün adı ile başlıklı sekmenin altına ekleyin. İstenen pozlama konumunu görüntülemek ve ayarlamak için deseni uyarma seçeneğini seçin.
Ardından, LED kontrol sekmesi altında ışık yoğunluğunu %60'a ve pozlama süresini 40 saniyeye ayarlayın ve pozlama işlemini başlatın. Hücre salınımını sağlamak için hidrojel bozunmasını gerçek zamanlı olarak ve Brightfield modunda izleyin. Serbest bırakılan hücreyi toplamak için, numunenin açıkta kalan alanını çıplak gözle görselleştirmek için mikroskop filtresini Brightfield'dan TRITC'ye değiştirin.
Açıkta kalan alan bulunduktan sonra, tüpün ucunu ışınlanmış noktaya yerleştirin, ardından hücre alımını gerçek zamanlı olarak izlemek için mikroskop filtresini tekrar Brightfield'a değiştirin. Serbest bırakılan hücreleri içeren 200 mikrolitre çözeltiyi dikkatlice çekmek için borunun diğer ucuna bağlı şırıngayı kullanın ve çözeltiyi DNA analizi veya kaplama için 1,5 milimetrelik bir santrifüj tüpüne aktarın