Bakteri Suşları Arasındaki Rekabetçi Etkileşimleri İncelemek için Coincubation Testi

Her biri suş tanımlaması için farklı bir floresan işaretleyici ifade eden iki bakteri suşu, bir referans ve bir rakip ile başlayın.

Suşları eşit oranlarda karıştırın ve karışımı bir agar plakasına yerleştirin.

Suşların büyümesine ve etkileşime girmesine izin vermek için plakayı inkübe edin.

Rakip, temasa bağlı veya temastan bağımsız mekanizmalar yoluyla referans gerinimi geride bırakır.

Temasa bağlı rekabette rakip, toksinleri doğrudan referans suşa iletmek için özel salgı sistemleri kullanır.

Temastan bağımsız rekabette, yarışmacı, çevreleyen ortama yayılan ve referans suşa giren toksinleri serbest bırakır.

Bu toksinler, hücre duvarı sentezi, DNA replikasyonu ve protein sentezi dahil olmak üzere referans suştaki temel süreçleri bozarak büyümenin durmasına, hücre ölümüne ve floresan ekspresyonunun azalmasına yol açar.

İnkübasyondan sonra plakayı floresan mikroskobu altında inceleyin.

Rakibin daha parlak floresansına kıyasla referans suştaki azaltılmış floresan, rekabetçi etkileşimleri gösterir.

Referans suşu ve rakip suşu bire bir oranında karıştırmak için, OD 1.0'a normalize edilmiş her suştan 100 mikrolitreyi etiketli bir 1.5 mililitrelik santrifüj tüpüne ekleyin ve bir ila iki saniye vor