JoVE Encyclopedia of Experiments
Mikrobiyoloji
0 görüntüleme • 2:58 dk • September 26th, 2025
Vajinal ortamı koşullandıran ve enfeksiyona duyarlılığını artıran bir hormonla tedavi edilen dişi bir fareyi ele alalım.
Arka kısımları yükseltmek ve vajinal açıklığı ortaya çıkarmak için ön ayaklarıyla kafesi kavrarken fareyi kuyruğundan kaldırın.
Ölü epitel hücreleri ve endojen vajinal mikroplarla birlikte patojenlere karşı koruyucu bir bariyer olan mukusu temizlemek için vajinal lümeni anaerobik bir tamponla durulayın.
Sıvı kaybını en aza indirmek için fareyi bağlı tutarken vajinayı hemen anaerobik bir bakteriyel patojen süspansiyonu ile aşılayın.
Birlikte aşılama için, daha önce olduğu gibi aynı hacmi kullanarak başka bir anaerobik bakteriyel patojenin süspansiyonunu uygulayın.
Çapraz kontaminasyonu önlemek için aşılanmış fareyi aşılanmamış farelerden ayrı tutun.
Aşılamayı takiben, bakteriler vajinal epitele yapışır, koloniler halinde büyür ve konakçı bağışıklık tepkilerine karşı bir bariyer görevi gören koruyucu bir biyofilm tabakası geliştirir.
70 mikrolitre steril anaerobik PBS'yi fare numaralarıyla etiketlenmiş 1.5 mililitrelik mikrosantrifüj tüplerine pipetleyerek anaerobik odadaki vajinal lavaj tüplerini hazırlayın.
Tüpleri sıkıca kapatın ve hazneden çıkarın. Vajinal lavaj yapmak için öncelikle ön patileriyle kavrayabileceği bir kafesin üzerine bir fare yerleştirin. Ardından, kuyruğun orta kısmını nazikçe kavrayın ve arka kısımlar hafifçe yükselecek ve vajinal açıklık ortaya çıkacak şekilde kaldırın.
Etiketli yıkama tüpünden 50 mikrolitre PBS çektikten sonra, pipet ucunu vajinal lümene iki ila üç milimetre yavaşça sokun ve üç ila dört kez pipetleyerek PBS ile yıkayın. Ardından, yıkama malzemesini kalan 20 mikrolitre kullanılmamış PBS ile orijinal yıkama tüpüne geri aktarın. Bu vajinal lavajdan hemen sonra, her fareyi 20 mikrolitre bakteri süspansiyonunu veya araç kontrolünü vajinal olarak aktararak aşılayın.
İki farklı bakteri suşu ile birlikte aşılama deneyleri için, suşları önceden karıştırmak yerine, her bir bakteri süspansiyonundan 10 mikrolitre ile ayrı ayrı aşılayın. Uygulanan hacmin vajinal girişte hemen birikmesini önlemek için, farenin arka kısmını 10 ila 20 saniye tutmaya devam edin. Aşılanmış fareyi yeni bir kafese veya önceden aşılanmış kafes arkadaşlarıyla aktarın ve prosedürü diğer farelerle tekrarlayın.