JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Mikrobiyoloji
0 görüntülenme • 2:30 dk. • September 26th, 2025
Farklı domates türlerinde bakteri direncini taramak için steril koşullar altında yetiştirilen 10 günlük domates fideleriyle başlayın.
Bu fideler, ortaya çıkan gerçek yaprakları ve yerleşik kökleri sergiler.
İnokulumun bitki yüzeyine düzgün bir şekilde yayılmasını kolaylaştırmak için her iki suşu da bir yüzey aktif madde ile karıştırılmış patojenik bakterilerle doldurun. Fidenin aşı ile temasını en üst düzeye çıkarmak için plakayı eğin ve çevirin.
Fazla inokulumu çıkarın, plakaları tekrar kapatın ve bir büyüme odasında inkübe edin.
Bakteriler stomalardan girer ve yaprak hücreleri arasındaki hücre dışı boşluk olan apoplastı kolonize eder.
Bakteriler, bitki bağışıklık tepkilerini baskılamak için bitki hücrelerine efektör proteinler enjekte eder.
Duyarlı suşlar, bu efektörleri tespit edemez, bu da bakteri çoğalmasına ve bakteriyel toksin kaynaklı bitki dokusu hasarına izin verir.
Dirençli suşlar, efektörleri tanır ve bakterileri öldürmek için reaktif oksijen türleri üretir.
İnkübasyon sonrası, dirençli suşlar sürekli büyüme gösterirken, duyarlı suşlar durmuş gelişme gösterir.
On günlük fidelerin bulunduğu plakaları büyüme odasından biyogüvenlik kabinine aktarın ve cerrahi bandı çıkarın. Ardından her plakaya altı mililitre aşı aktarın.
Fideleri bir pipet ucuyla yavaşça aşının içine itin ve üç dakika boyunca bir zamanlayıcı başlatın. Her iki elinizde birer tabak tutun ve fidelerin kotiledonlarını ve yapraklarını batırmak için tabağın önünü aşağı doğru eğin. Aşıyı beş ila yedi kez yan yana çevirin, ardından kökleri aşıyla kaplamak için plakaları geriye doğru eğin.
Plakaları tekrar aşağı doğru eğin ve döngüyü toplam üç dakika tekrarlayın. İnokulumu plakalardan dökün, düz bir yüzeye koyun ve kalan aşıyı ikinci kez dökün. Plakaları tekrar sarın ve büyüme odasına geri yerleştirin.