JoVE Encyclopedia of Experiments
Mikrobiyoloji
0 görüntüleme • 2:46 dk • September 26th, 2025
Besin açısından zengin bir ortamda sıvı bir Sporosarcina pasteurii kültürü ile başlayın.
Üre, kalsiyum klorür, amonyum klorür ve sodyum bikarbonat içeren bir zenginleştirme stok çözeltisi alın.
Zenginleştirme ortamının bir kısmını bakteri kültürü tüpüne ekleyin.
Bakteri hücrelerini ve besin maddelerini eşit şekilde karıştırmak için tüpleri vorteksleyin.
Zenginleştirilmiş kültürleri sallanmayan bir inkübatörde inkübe edin.
Gram pozitif bir toprak bakterisi olan Sporosarcina pasteurii, üre varlığında üreaz enzimini üretir.
Üreaz, üreyi amonyum ve karbonat iyonlarına ayırır.
Amonyum klorür ve sodyum bikarbonat, mineral çökelmesini destekleyen alkali pH'ın korunmasına yardımcı olur.
Karbonat iyonları, çözünmeyen kalsiyum karbonat oluşturmak için kalsiyum klorürden gelen kalsiyum iyonları ile reaksiyona girer.
Bu çökelti, bakteri hücrelerinin etrafında oluşmaya başlar ve stabil bir kristal form olan kalsite kristalleşir.
Bu kristaller, tüpün dibinde beyaz birikintiler olarak yerleşir ve mikrobiyolojik olarak indüklenen kalsit çökelmesini veya MICP'yi gösterir.
Hazırlanan sıvı kültürün dokuz mililitresini birkaç sterilize edilmiş on mililitrelik santrifüj tüpüne aktarın. Üre litresi başına iki gram, amonyum klorür litresi başına bir gram, sodyum bikarbonat litresi başına 212 miligram ve kalsiyum klorür litresi başına 280 miligramı dikkatlice ölçmek için analitik bir terazi kullanarak 100 mililitre harici zenginleştirme stok çözeltisi hazırlayın.
Taze ortamlı bir behere üre ve otoklav hariç tüm malzemeleri birleştirin. Otoklavlamadan sonra, üreyi bir mililitre taze ortamla karıştırın ve zenginleştirme ortamına eklemeden önce çözeltiyi 0,2 mikrometrelik bir filtreyle donatılmış bir şırıngadan geçirin. Hazırlanan kültürün dokuz mililitresini içeren sterilize edilmiş santrifüj tüplerine katkı maddeleri içeren zenginleştirme ortamının bir mililitresini ekleyin.
Her tüpü vorteksleyin ve 30 santigrat derecede sallanmayan bir inkübatörde inkübe edin. Yağışın başlaması için tüm üniteleri düzenli olarak izleyin.