JoVE Encyclopedia of Experiments
Mikrobiyoloji
0 görüntüleme • 2:49 dk • September 26th, 2025
Çok kuyulu bir plakaya birden fazla polimer lekesi olan sterilize edilmiş, agaroz kaplı bir mikrodizi slaytı yerleştirin. Agaroz, spesifik olmayan bakteri bağlanmasını en aza indirir.
Slayta karışık bir bakteri kültürü ekleyin ve hafif çalkalayarak inkübe edin.
Bakteriler, uygun polimer noktalarına bağlanan farklı yapışma proteinleri salgılar ve bu da zamanla daha güçlü bakteri bağlanması ve kolonizasyonu ile sonuçlanır.
Tersine, kovucu polimerler protein adsorpsiyonuna direnir ve bakteri bağlanmasını azaltır.
Gevşek bağlı bakterileri çıkarmak için slaytı fosfat tamponlu salin veya PBS ile durulayın.
Yüzeye yapışan bakterilerin DNA'sını boyamak için DAPI ekleyin.
Slaytı PBS ile yıkayın, kurutun ve yapışkan bir lamel ile kapatın.
Dış slayt yüzeyini etanol ile sterilize edin.
Polimer lekelerini bulmak için parlak alan görüntüleri yakalayın. Ardından, polimer noktalarındaki floresansı algılamak için floresan moduna geçin.
Azalmış floresan sergileyen polimer lekeleri, minimum bakteri bağlanmasını gösterir ve bakteri kovucu polimerler olarak tanımlanır.
Mikrodiziler için aşıyı kültürledikten ve hazırladıktan sonra, metin protokolüne göre, UV ile sterilize edilmiş polimer mikrodizilerini dikdörtgen dört oyuklu plakalara yerleştirin ve altı mililitre karışık bakteri kültürü ekleyin. Plakaları beş gün boyunca hafif çalkalama ile 37 santigrat derecede inkübe edin. İnkübasyondan sonra, mikrodizileri iki kez nazikçe durulamak için PBS kullanın.
Daha sonra PBS'ye mililitre DAPI başına bir mikrogram ekleyin ve 30 dakika inkübe edin. Ardından, mikrodizileri yeni bir dört oyuklu plakaya aktarın, mikrodizileri PBS ile örtün ve ardından hafifçe döndürün. Ardından PBS'yi bir kez değiştirin ve yıkamayı tekrarlayın.
Duruladıktan sonra, mikrodizileri bir hava akışı altında kurutun, ardından sızdırmazlık filmi uygulayın ve mikrodizi slaytlarına cam lamları yapıştırın. Tutkal kuruduğunda, dış yüzeyi sterilize etmek için %70 etanol kullanın. 20x subjektif ile donatılmış bir floresan mikroskobu kullanarak, parlak alan ve DAPI kanallarındaki her polimer noktası için tek görüntüler yakalayın.