Biyolüminesans Enterohemorajik Escherichia coli İnokulumunun Hazırlanması

Dondurulmuş bir enterohemorajik Escherichia coli veya patojenik bir bağırsak bakterisi olan EHEC stoğu ile başlayın.

Bu bakteriler, gerçek zamanlı biyolüminesans görüntüleme için lusiferaz eksprese eden bir plazmit ve seçim için bir antibiyotik direnç geni taşır.

Bakterileri uygun antibiyotiği içeren bir agar plakasına çizin ve tek tek plazmit taşıyan kolonileri izole etmek için inkübe edin.

Tek bir koloni seçin ve antibiyotik takviyeli et suyunda kültürleyin. Genetik olarak tekdüze, plazmit açısından kararlı bir popülasyonu çoğaltmak için kuluçkaya yatırın.

Logaritmik büyümede hücreleri senkronize etmek için kültürü havalandırılmış koşullar altında genişletin.

İstenilen optik yoğunluğa ulaşılana kadar bakteri üremesini izleyin.

Ardından, bakterileri peletlemek için kültürü santrifüjleyin.

Süpernatanı çıkarın ve peleti steril tuzlu su ile yıkayın.

Tekrar santrifüjleyin. Süpernatanı atın ve peleti daha küçük bir salin hacminde yeniden süspanse edin.

Bu konsantre EHEC süspansiyonu artık biyolüminesans tabanlı izleme için hazırdır.

Başlamak için, mililitre başına 50 mikrogram kanamisin içeren bir LB agar plakasına lusiferaz plazmidi barındıran negatif 80 santigrat derecelik bir E.coli O157 H7 E