Viral Partikül Üretimi için Borrelia burgdorferi Kültürlerinin Hazırlanması ve İndüksiyonu
JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Mikrobiyoloji
0 görüntülenme • 3:17 dk. • September 26th, 2025
Patojenik bir bakteri olan Borrelia burgdorferi'nin genetiği değiştirilmiş bir suşunun kültürüyle başlayın.
Bu suş, antibiyotik direnci sağlayan bir hedef geni içerecek şekilde tasarlanmış, genomuna entegre edilmiş uyuyan bakteriyofaj DNA'sını taşır.
İlgili antibiyotiği ekleyin ve kültürü inkübe edin. Antibiyotik direnç geni, antibiyotiği inhibe eden ve yalnızca geni barındıran bakterilerin çoğalmasını sağlayan bir proteini ifade eder.
Kültür istenen yoğunluğa ulaştığında, hücreleri pelet haline getirmek için santrifüjleyin ve süpernatanı atın.
Peleti yeniden süspanse edin, kimyasal bir indükleyici ekleyin ve DNA hasarını indüklemek için inkübe edin.
Ortaya çıkan DNA onarım yanıtı, bakteriyofaj DNA'sını eksize ederek replikasyonunu, yapısal proteinlerin ekspresyonunu ve antibiyotik direnç genini taşıyan yeni viryonların birleşmesini başlatır.
Kültürü tekrar santrifüjleyin, süpernatanı atın ve hücreleri taze bir ortamda yeniden süspanse edin.
Olgun viryonlar içeren bakteri hücreleri, daha sonraki uygulamalar için hazırdır.
Transdüksiyon protokolü için 150 mikrolitre uygun Borrelia burgdorferi klonunu, sıkıca kapatılmış steril konik santrifüj tüplerinde 15 mililitre BSK'ya aşılayın. Daha son
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin