Streptomyces coelicolor'un Vahşi Tip ve Mutant Suşlarının Fenotipik Karşılaştırması

İpliksi bir toprak bakterisi olan Streptomyces coelicolor'un vahşi tip ve mutant suşlarının kültürleriyle başlayın.

Mutant suşlar, vahşi tipten fenotipik farklılıklara neden olan gelişimsel genlerde mutasyonlar taşır.

Yaşla birlikte spontan mutasyonların birikmesini en aza indirmek için kolonileri taze plakalara yeniden kültürleyin.

Çapraz kontaminasyonu önlemek için suşların tek kolonilerini bir plakanın ayrı bölgelerine kama deseninde çizin

Bakteri üremesini teşvik etmek için plakayı inkübe edin.

Vahşi tip suşlar, kolonilere bulanık bir görünüm veren uzun gri pigmentli spor zincirlerine dönüşen hava filamentleri oluşturur.

Buna karşılık, mutant suşlar ya hava filamentleri geliştiremez, bu da kel bir görünüme neden olur ya da daha az pigmentli spor üreterek hava filamentlerinin beyaz görünmesine neden olur.

Koloni morfolojisini görselleştirmek için Petri kabını tek tip bir arka plan üzerine yerleştirin.

Vahşi tip ve mutant suşlar arasındaki fenotipik farklılıkları görsel olarak karşılaştırmak için görüntüler yakalayın.

Streptomyces suşlarını MS agar plakalarına ve kültürü tek kolonilere çizmek için Saunders 2012'de gösterilen kadran çizgi yöntemi gibi standart bir yöntem kullanın.

Her dört ila altı günde bir, tek bir koloni seçin ve yeni bir tabağa yeniden çizin. Koloniler yaşlandıkça rastgele mutasyona yatkın hale gelirler. Metin protokolüne göre mutajenez gerçekleştirdikten sonra, vahşi tip ana suşa kıyasla her mutant için koloni morfolojisini not edin.

Yeni Streptomyces türlerini karakterize ederken, yeni izolatı iyi çalışılmış bir türün temel şeklini, koloni yüzeyini, opaklığını, yüksekliğini ve pigmentasyonunu not ederek karşılaştırın. Bir MS agar plakasını etiketleyin ve vahşi tip ve mutant suşları kama desenlerinde çizin. Çapraz kontaminasyonu önlemek için hiçbir suşun başka bir suşa temas etmemesine dikkat edin.

Suşların plaka üzerine çizildiği tarih ve saati not edin. Ardından plakaları 30 santigrat derecede inkübe edin. Unutmayın, Streptomyces numunenizi her zaman kontaminasyondan korumak son derece önemlidir, tüm adımlar için en iyi steril tekniğinizi kullanın, plakaları ve tüpleri mümkün olan en kısa sürede açın.

Arka planı homojenleştirmek için yetiştirilen Petri kaplarını renkli veya beyaz kağıda yerleştirin. Kağıda suş adını, tarihini, inkübasyon sıcaklığını ve ilk plaka çizgisinden itibaren geçen süreyi yazın.

Karışıklığın minimum düzeyde olması için kağıt arka plan üzerinde yazılı gerinim bilgisi ile plakanın dijital fotoğraflarını çekin.