Streptomyces'te Gelişimsel Mutantların Değerlendirilmesi için Faz Kontrast Mikroskobu

İpliksi bir toprak bakterisi olan Streptomyces coelicolor'un vahşi tip ve mutant suşlarının kolonilerini içeren agar plakaları ile başlayın.

Koloni yüzeyinin üzerinde uzanan filamentler olan hava filamentlerinin açıkça görülebildiği yoğun koloni büyümesi bölgesine steril bir lamel yerleştirin.

Hava filamentlerini ve ilgili sporları lamel yüzeyine aktarmak için lamel hafifçe bastırın.

Ardından, montaj ortamı olan bir mikroskop lamı alın ve bakteri yapılarını korumak için lamel hücre tarafı aşağı bakacak şekilde monte edin.

Slaytı bir mikroskop tablasına yerleştirin, lamel üzerine bir damla daldırma yağı ekleyin ve objektifi hizalayın.

Faz kontrast mikroskobu kullanarak, hem vahşi tip hem de mutant suşlardan hava filamentlerinin görüntülerini elde edin.

Vahşi tip filamentler, eşit boyutta, düzenli aralıklı sporlar sergiler.

Buna karşılık, mutant suşlar, şişkin filamentler, düzensiz sporlar veya parçalanmış sporlar gibi kusurlar sergileyerek vahşi tip ile mutantlar arasındaki gelişimsel fenotipik farklılıkları ortaya çıkarır.

Bakteri üremesinin lamel kaldırmasını hazırlamak için, steril bir lamel almak için steril cımbız kullanın ve lameli bakteri üremesinin yoğun olduğu bir MS agar plakasına yerleştirin. Cımbız kullanarak, bakteri sporlarının ve hava miselyumunun yeterli transferini sağlamak için lamel arkasına hafifçe bastırın. Lameli plakadan alın ve hücre materyali 15 mikrolitrelik %50 gliserol damlası içeren bir mikroskop lamının yüzeyine bakacak şekilde 45 derecelik bir açıyla yerleştirin.

Lamelin gliserolün üzerine düşmesine izin verin, bu da hava kabarcıklarını azaltacaktır. Çeşitli zaman aralıklarında faz kontrast mikroskobu yapmak için, hazırlanan lamı mikroskop tablasına yerleştirin ve lamel ortasına bir damla daldırma yağı ekleyin. 100x faz objektifini yerine döndürün ve kondenser taretini uygun eşleşen faz ayarına getirin.

Objektif merceği yağla temas ettiğinde, görüntüyü odaklamak için yalnızca ince ayar düğmesini kullanın. Mutant suşlar ve vahşi tip arasındaki gözle görülür ve tutarlı farklılıkları ayırt etmek için birkaç görüş alanını inceleyin. Spor oluşturma yeteneği, spor boyutu ve şekli ve toplam spor sayısı gibi.