JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Mikrobiyoloji
0 görüntülenme • 2:05 dk. • September 26th, 2025
Konakçıya özgü bir büyüme ortamı içeren steril bir tüp ile başlayın. Bir gecede yetiştirilen bir konakçı bakteri kültürü ekleyin.
Ardından, ikili bir kültür oluşturmak için parazitik ultra küçük bir bakteri olan Saccharibacteria içeren bir süzüntü ekleyin.
İkili kültürü, konakçı bakteriler için en uygun olan mikroaerobik koşullar altında inkübe edin.
Ortamdaki besinler, konakçı bakterilerin büyümesini ve çoğalmasını teşvik ederek kültürü bulanıklaştırır.
Zorunlu parazitik yapıları nedeniyle, Sakkaribakteriler konakçı bakteri hücrelerinin yüzeyine yapışır.
Bu bakteriler daha sonra konakçı ile yakın zar temasları oluşturur ve hayatta kalmaları ve çoğalmaları için gerekli besinleri çıkarır.
Enfeksiyon ilerledikçe bakteri konağının büyümesi yavaşlar ve bu da bulanıklığın azalmasına neden olur.
Sürekli büyümeyi desteklemek için ikili kültürü düzenli aralıklarla taze ortama aktarın.
Bu, konakçının yaşayabilirliğini korur ve ikili kültürün uzun vadeli istikrarını destekler.
Tüplere iki mililitre uygun büyüme ortamı ekleyerek kültür tüplerini hazırlayın.
Daha sonra, her tüpe 200 mikrolitre gece boyunca konakçı organizma kültürü ve 100 ila 200 mikrolitre yeniden süspanse edilmiş filtrelenmiş numune ekleyin. Birleştirilmiş numuneleri konakçı organizma için uygun koşullar altında inkübe edin. 200 mikrolitre ikili kültürü yeni bir tüpte iki mililitre taze büyüme ortamına aktararak hücreleri her iki ila üç günde bir geçirin.
Pasajlanan kültürler, 200 mikrolitre enfekte olmamış konakçı kültürde büyüme göstermiyorsa, hücreleri geçerken aşılanmış tüpleri inkübatöre geri koyun.