C. elegans Knockdown'ların Taranması için Çok Kuyulu Sıvı Bazlı Bir Test

Bir C. elegans genini hedef alan gene özgü bir ek olsun veya olmasın, RNAi bakterileri ile önceden beneklenmiş agar ortamı içeren çok oyuklu bir plaka alın.

Tohum, L1 aşamasındaki solucanları kuyucuklara senkronize etti ve RNAi bakterileri üzerinde beslenmeye izin vermek için onları inkübe etti.

Ek parça, spesifik solucan genlerini hedef alan ve gene özgü bir yıkım fenotipi oluşturan girişim yapan RNA üretir.

Kuyucuklara tampon ekleyin ve solucanları yavaşça yeniden askıya alın.

Süspansiyonu derin kuyulu bir plakaya aktarın ve solucanların yerçekimi ile yerleşmesine izin verin.

Bir miktar tampon tutarak süpernatanı çıkarın.

Solucanları tamponla yıkayın, ardından az miktarda tampon bırakarak süpernatanı atın.

Ardından, patojenik bakteriler içeren çok kuyulu bir tahlil plakası alın.

Konakçı-patojen etkileşimlerini mümkün kılmak için belirli sayıda kontrol ve yıkım solucanını ilgili kuyucuklarına dağıtın. Patojenik bakteriler, solucan ölümüne neden olan bileşikler salgılar.

Gene özgü yıkımın solucanın hayatta kalması üzerindeki etkisini değerlendirmek için solucan ölümlerini karşılaştırın.

Kuyu başına 300 solucan içeren 24 oyuklu bir plakanın kuyucuğu başına bir mililitre S Bazal ekleyin. Plaka