C. elegans Larvalarında Patojenik Bakteri Kaynaklı Mortalitenin Değerlendirilmesi

Agar üzerinde kültürlenmiş patojenik bir bakteri ile başlayın.

Bakterileri kazıyın, bir tamponda askıya alın ve bakteri canlılığını korumak için bir ortam ekleyin.

Süspansiyonu bir mikroplakaya dağıtın.

Daha sonra, patojenlere karşı duyarlılığı artmış veya direnci artmış ayrı C. elegans larva suşları alın ve yerleşmelerine izin verin.

Süpernatanı çıkarın, larvaları taze bir ortamda yeniden süspanse edin ve bakterileri içeren mikroplakaya aktarın.

Mikroplakayı gaz geçirgen bir zarla kapatın ve inkübe edin. Bakteriler, stres yollarını aktive eden ve hücre ölümüne yol açan toksik metabolitler salgılar.

Bakterileri yok etmek için kuyucukları yıkayın, hücre geçirimsiz bir floresan boya ekleyin ve inkübe edin.

Boya, yalnızca zarları bozulmuş ölü larva hücrelerine nüfuz eder ve nükleik asitlerine bağlanır.

Fazla boyayı çıkarmak için yıkayın ve duyarlı ve dirençli suşlarda mortaliteyi değerlendirmek için floresan lekeli solucanları görüntüleyin.

Sıvı öldürme tahlili yapmak için, P. aeruginosa'yı bir SK plakasından çıkarmak için bir hücre kazıyıcı kullanın ve bakterileri yaklaşık 5 mililitre S Bazal içinde yeniden süspanse edin.

Bir spektrofotometre kullanarak bakteri süspansiyonunun OD 600'ünü ölçün