JoVE Encyclopedia of Experiments
Mikrobiyoloji
0 görüntüleme • 2:14 dk • September 26th, 2025
Lusiferaz ve substrat sentezi için gerekli enzimleri kodlayan lüminesans operonunu taşıyan bir deniz biyolüminesans bakteri suşu ile başlayın.
Doğal tuzluluğu taklit etmek ve büyümeyi desteklemek için suşu yapay deniz suyuyla desteklenmiş, besin açısından zengin bir agar plakasına çizin.
Ayrı koloniler elde etmek için inkübe edin, ardından tek bir koloniyi izole edin ve yapay deniz suyu içeren sıvı ortama aşılayın.
Üstel fazda gece boyunca büyümeyi teşvik etmek için çalkalama ile inkübe edin.
Gece kültürünün belirli bir hacmini taze ortama aktarın ve bakteri yoğunluğunu artırmak için inkübe edin.
Popülasyon genişledikçe, bakteriler otoindükleyiciler salgılar, hücrelerde biriken ve hücrelere yayılan, burada hücre içi reseptörlere bağlanarak lüminesans operonunu aktive eden sinyal molekülleri salgılar.
Bu aktivasyon, substratın lusiferaz ekspresyonunu ve biyosentezini indükler.
Lusiferaz, mavi-yeşil ışık yayarak substrat oksidasyonunu katalize eder.
Deniz bakterilerinde lüminesans operon aktivasyonunun ve ışık emisyonunun bir göstergesi olarak biyolüminesans kültürünü izleyin.
Metin protokolüne göre ortamı hazırladıktan sonra, bakteriyel biyolüminesans suşlarını yapay deniz suyu ortamı agar plakalarına çizin ve gece boyunca 24 ila 30 santigrat derecede inkübe edin.
Plakadan tek bir koloni ile 100 mililitre yapay deniz suyu ortamını aşılayarak bir gece kültürü hazırlayın. Daha sonra kültürü gece boyunca 24 ila 30 santigrat derece ve 120 RPM'de inkübe edin. Ertesi gün, 800 mililitre yapay deniz suyu ortamını 8 mililitre gece kültürü ile aşılayın.
Bakteri hücrelerini 24 ila 30 santigrat derece ve 120 RPM'de inkübe edin ve hücreleri parlamaya başlayana kadar gözlemleyin.
Bu makale, lüminesans operonunun quorum-sensing aracılı aktivasyonunu incelemek amacıyla denizel biyolüminesans bakterilerin kültürlenmesini ve in situ izlenmesini göstermektedir. Protokol, hücre yoğunluğunun ve ışık yayılımının gerçek zamanlı gözlemlenmesine olanak tanıyarak mikrobiyal iletişim ve gen regülasyonu hakkında bilgiler sunmaktadır.
Deniz bakterilerinde lüminesans operon aktivasyonunun gerçek zamanlı izlenmesi, quorum sensing aracılı gen ekspresyonunun doğrudan ve kantitatif bir okumasını sağlar. Bu yetenek, mikrobiyal iletişim ve gen düzenleme çalışmaları için erken aşama hedef doğrulama ve mekanistik risk azaltma imkanı sunar. Bu yaklaşım, keşif hatları içindeki yolak sorgulama ve fonksiyonel genomik süreçlerinde öngörücü güvenilirliği destekler.
Bu yöntem, erken aşamadaki hipotez testlerinden analiz geliştirmeye ve mikrobiyal sistemlerdeki translasyonel araştırmalara kadar olan keşif sürecine entegre edilmektedir.
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
Son güncelleme: 29 Ağustos 2026