JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Mikrobiyoloji
0 görüntülenme • 2:14 dk. • September 26th, 2025
Lusiferaz ve substrat sentezi için gerekli enzimleri kodlayan lüminesans operonunu taşıyan bir deniz biyolüminesans bakteri suşu ile başlayın.
Doğal tuzluluğu taklit etmek ve büyümeyi desteklemek için suşu yapay deniz suyuyla desteklenmiş, besin açısından zengin bir agar plakasına çizin.
Ayrı koloniler elde etmek için inkübe edin, ardından tek bir koloniyi izole edin ve yapay deniz suyu içeren sıvı ortama aşılayın.
Üstel fazda gece boyunca büyümeyi teşvik etmek için çalkalama ile inkübe edin.
Gece kültürünün belirli bir hacmini taze ortama aktarın ve bakteri yoğunluğunu artırmak için inkübe edin.
Popülasyon genişledikçe, bakteriler otoindükleyiciler salgılar, hücrelerde biriken ve hücrelere yayılan, burada hücre içi reseptörlere bağlanarak lüminesans operonunu aktive eden sinyal molekülleri salgılar.
Bu aktivasyon, substratın lusiferaz ekspresyonunu ve biyosentezini indükler.
Lusiferaz, mavi-yeşil ışık yayarak substrat oksidasyonunu katalize eder.
Deniz bakterilerinde lüminesans operon aktivasyonunun ve ışık emisyonunun bir göstergesi olarak biyolüminesans kültürünü izleyin.
Metin protokolüne göre ortamı hazırladıktan sonra, bakteriyel biyolüminesans suşlarını yapay deniz suyu ortamı agar plakalarına çizin ve gece boyunca 24 ila 30 santigrat derecede inkübe edin.
Plakadan tek bir koloni ile 100 mililitre yapay deniz suyu ortamını aşılayarak bir gece kültürü hazırlayın. Daha sonra kültürü gece boyunca 24 ila 30 santigrat derece ve 120 RPM'de inkübe edin. Ertesi gün, 800 mililitre yapay deniz suyu ortamını 8 mililitre gece kültürü ile aşılayın.
Bakteri hücrelerini 24 ila 30 santigrat derece ve 120 RPM'de inkübe edin ve hücreleri parlamaya başlayana kadar gözlemleyin.