$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Önceden ısıtılmış bir besin ortamıyla doldurulmuş mikroakışkan bir plakayla başlayın.
Plakayı manifold sistemine takın ve kurulumu kapatın. Hava kabarcıklarını gidermek için ortamı kanallardan geçirin.
Kurulumu bir mikroskop tablasına yerleştirin ve görüntüleme sırasında plakanın genişlemesini önlemek için önceden ısıtın.
Daha sonra ortamı çıkarın, hücre girişlerine bir bakteri kültürü ve çözelti girişlerine strese neden olan bir ortam ekleyin.
Strese neden olan ortam, hücresel kütlede bir artışı engellemeden hücre bölünmesini durduran bir antibiyotik içerir.
Sistemi kapatın, ardından bakterileri plakanın kültür odasına aktarmak için hücre yüklemesini başlatın.
İletilen ışığı kullanarak, eşit olarak dağılmış tek hücreler içeren bir görüş alanı bulun.
Hücreleri antibiyotiğe maruz bırakmak için odaya strese neden olan ortamı enjekte edin.
Faz kontrast modunu kullanarak, hücre bölünmesinin antibiyotik aracılı inhibisyonunun neden olduğu artan DNA içeriğine sahip uzun filamentli hücrelerin oluşumunu gözlemlemek için hızlandırılmış görüntüler yakalayın.
İlk olarak, koruma solüsyonunu mikroakışkan plakadan çıkarın ve Mikroakışkan Yazılım Kullanıcı Kılavuzunda açıklandığı gibi önceden 37 santigrat dereceye ısıtılmış taze ortamla değiştirin. Mikroakışkan plakayı manifold sistemine takın.
Ve mikroakışkan yazılımda, plakayı manifold sistemine kapatmak için Mühürle düğmesine tıklayın. Bundan sonra, üzerine tıklayın Hazırlama düğmesine basın. Mikroakışkan plakayı manifold sistemi ile mikroskop aşamasına yerleştirin ve mikroakışkan odanın genişlemesini önlemek için iki saat boyunca 37 santigrat derecede ön ısıtma yapın.
Seal Off düğmesine tıklayarak mikroakışkan sistem üzerindeki mikroakışkan plakayı kapatın. Sekizinci kuyudaki ortamı 150 mikrolitre kültür numunesi ile değiştirin ve bir kuyudan beşe kadar olan ortamı, strese neden olan reaktif olsun veya olmasın, istenen ortamla değiştirin. Mikroakışkan plakayı kapatın ve mikroskop tablasına yerleştirin.
Mikroakışkan yazılımda hücre yükleme prosedürünü çalıştırın. İletilen ışıkta mikroskop altına bakarak hücrelerin yüklenmesinin tatmin edici olup olmadığını kontrol edin. İletilen ışık modunda dikkatlice odaklanın ve izole edilmiş bakterileri gösteren ve aşırı kalabalık olmayan, 100 mikrolitre kare başına yaklaşık 10 ila 20 hücre olan birkaç görüş alanı seçin.
Mikroakışkan yazılımda, Özel Bir Sıra Çalıştır düğmesine tıklayın, ardından strese neden olan ortamın enjeksiyonunu 10 dakika boyunca iki PSI'da programlayın, ardından stres tedavisinin istenen süresi boyunca bir PSI'da enjeksiyonu programlayın. İletilen ışıkta faz kontrastı ve gerekirse mCherry sinyali için 10 nanometre uyarma ışık kaynağı kullanarak her 560 dakikada bir kare ile hızlandırılmış modda mikroskopi görüntüleme gerçekleştirin. Mikroskobik görüntü alımını ve mikroakışkan enjeksiyon protokolünü aynı anda başlatın.