JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Mikrobiyoloji
0 görüntülenme • 2:50 dk. • September 26th, 2025
Vezikül Çekirdeklendirici Peptit veya vezikül oluşumunu destekleyen kısa bir peptit olan VNp ile etiketlenmiş rekombinant proteinleri kodlayan bir bakteri türünün kültürüyle başlayın.
Kültüre bir indükleyici ekleyin ve inkübe edin. İndükleyici, protein ekspresyonunu tetikler.
VNp, iç zara gömülür ve VNp etiketli proteinleri tomurcuklanan veziküllere kapsülleyerek zar eğriliğini destekler.
Vezikül bakımından zengin ortamı bir tüpe aktarın. Vezikül bakımından zengin süpernatanı ayırmak için santrifüjleyin.
Ardından, kalan kirleticileri gidermek için süpernatanı filtreleyin.
Daha sonra membran yüzeyindeki vezikülleri yakalamak için süzüntüyü başka bir membran filtreden geçirin.
Membranı bir tabağa koyun ve fosfat tamponlu salin ekleyin.
Vezikülleri yavaşça ayırın ve süspansiyonu temiz bir tüpe aktarın.
Vezikül zarlarını bozmak ve proteinleri serbest bırakmak için süspansiyonu sonikleştirin.
Membran parçalarını ayırmak için lizatı santrifüjleyin.
Ortaya çıkan süpernatan, analize hazır, saflaştırılmış rekombinant proteinler içerir.
Mililitrede 20 mikrograma veya 84 mikromolara kadar nihai bir konsantrasyona IPTG ekleyerek T7 promotöründen rekombinant protein ekspresyonunu indükleyin. İndüksiyon iç
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin