Işıkla Aktive Olan Flavin Mononükleotid Kullanılarak Bakterilerin İnaktivasyonu

JoVE Encyclopedia of Experiments

Mikrobiyoloji

0 görüntüleme • 3:19 dk • September 26th, 2025

Patojenik bir bakteriyi sıvı bir ortam içeren bir tüpe aşılayarak başlayın.

Bakteri çoğalmasını teşvik etmek için inkübe edin, ardından kültürü taze tüplere aktarın.

Hücreleri topaklar halinde döndürün ve süpernatanı atın.

Bakteri peletlerini, artan konsantrasyonlarda flavin mononükleotidi (FMN), bir ışığa duyarlılaştırıcı ve kontrol görevi görecek FMN içermeyen bir tampon çözeltisi içeren tampon çözeltilerde yeniden süspanse edin.

Tüp içeriğini iyice karıştırın ve süspansiyonları cam tüplere aktarın.

Reaktif oksijen türleri (ROS) oluşturmak için moleküler oksijenle reaksiyona giren FMN'yi fotoaktive etmek için tüpleri görünür ışığa maruz bırakın.

ROS, bakteriyel hücresel bileşenlere zarar vererek bakteri canlılığını azaltır.

Numune alikotlarını katı ortama aktarın, eşit şekilde yayın ve hayatta kalan canlı bakterilerin koloniler halinde büyümesine izin vermek için inkübe edin.

İnkübasyon sonrası, FMN'nin doza bağlı etkisini değerlendirmek için kolonileri ölçün ve kontrole kıyasla bakteri canlılığındaki azalma yüzdesini hesaplayın.

Bir Staphylococcus aureus kolonisini 15 mililitrelik vidalı kapaklı bir test tüpünde 10 mililitre lizojeni suyuna aşılayın. Kültürü bir çalkalayıcıda 16 saat boyunca 37 santigrat derecede büyütün. 0,5 mililitre kültürü 1,5 mililitrelik bir santrifüj tüpüne aktarın.

Sterilize su ekleyerek kültürü 600 nanometrede 0,5 optik yoğunluğa seyreltin. Daha sonra 0,5 mililitre kültürü 1,5 mililitrelik bir santrifüj tüpüne aktarın. 10 dakika boyunca 14.000 G'de santrifüjleyin ve süpernatanı boşaltın.

Hücre peletine ve girdaba bir mililitre FMN tamponlu çözelti ekleyin. Işınlanmış kontrol için bir mililitre fosfat tamponu ekleyin. 30 mikromolar FMN ve fosfat tamponu içeren bir mililitre bakteri hücre solüsyonunu cam tüplere aktarın.

Bunları 30 dakika boyunca metre kare başına 10 watt'ta mor ışık altında bir radyasyon için yerleştirin. Daha sonra 30, 60 ve 120 mikromolar FMN ve fosfat tamponu içeren bir mililitre bakteri hücre solüsyonunu cam tüplere aktarın. Metrekare başına 20 watt'ta 120 dakika boyunca mavi ışıkla ışınlayın.

Ayrıca, bir mililitre 120 mikromolar FMN içeren bir tüpü 60 dakika boyunca ışınlayın. Işınlamadan sonra, bir luria agar plakasına 0.2 mililitre reaksiyon çözeltisi ekleyin. Çözeltiyi L şeklinde bir cam çubuk kullanarak yayın ve gece boyunca 37 santigrat derecede inkübe edin.

Ertesi gün, Staphylococcus aureus'un canlı plaka sayısını ve inaktivasyon oranını hesaplayın.

05:12

5-Aminolevulinik asit-aracılı Fotodinamik Tedavi etkisi Staphylococcus aureus biyofilm çalışmaya bir In Vitro modeli

İlgili videolar

0 Görüntüler

07:28

İnsan Nötrofiller ve Staphylococcus aureus Biyofilmleri Arasındaki Etkileşimleri Görselleştirmek ve Ölçmek için Standartlaştırılmış In vitro Testler

İlgili videolar

0 Görüntüler

05:13

Bakteriyel Fotodinamik İnaktivasyonda Fotoaktif Moleküllerin Değerlendirilmesi için LED Tabanlı İn Vitro Tarama

İlgili videolar

0 Görüntüler

05:57

Üzerinde görebilir Işık ve Gentamisin en Sinerjik Etkisi

İlgili videolar

0 Görüntüler

02:23

Reaktif Oksijen Türlerinin Üretimi Yoluyla Işık Kaynaklı Bakteriyel İnaktivasyonun Miktarının Belirlenmesi

İlgili videolar

0 Görüntüler

03:47

Biyofilm oluşumunun enzim aracılı inhibisyonunun mikroskobik değerlendirmesi

İlgili videolar

0 Görüntüler

02:59

Fotosensitator öncüsü kullanılarak bakteriyel biyofilmlerin ışıkla aktif tedavisi

İlgili videolar

0 Görüntüler

05:09

Bakterileri ortadan kaldırmak için trombosit ürünlerinin riboflavin ve UV ışığı tedavisi

İlgili videolar

0 Görüntüler

11:00

Yöntemler Bakteriyel Pyomelanin Üretim ønhibe ve Oksidatif Stres Duyarlılık içinde tekabül eden artış belirleme

İlgili videolar

0 Görüntüler

09:29

Çok ilaca dirençli için Antimikrobiyal Mavi Işık Tedavisinin Vivo İncelenmesinin Acinetobacter baumannii Biyoparlaklık ımaging'i kullanarak Enfeksiyonlar Yanık

İlgili videolar

0 Görüntüler

Son güncelleme: 29 Ağustos 2026