Antibiyotik Yüklü Polimerik Şeridin Antibakteriyel Etkinliğinin Belirlenmesi

Antibiyotik içermeyen ve antibiyotik yüklü polimerik şeritler içeren şırıngaları alın.

Şırıngaları metabolik olarak aktif bir patojenik bakteri kültürü ile doldurun.

Ortama eşit bakteri maruziyeti sağlamak için şırıngaları çalkalayarak inkübe edin.

İnkübasyon sırasında, yüklenen şeritten gelen antibiyotikler ortama yayılır ve bakteri üremesini engeller.

Antibiyotik içermeyen şeritli şırıngada bakteriler çoğalır.

Her şırıngadaki bakteri süspansiyonunu mikrosantrifüj tüplerine toplayın.

Alikotları çok kuyulu bir plakaya aktarın.

Lusiferin, lusiferaz enzimi ve bir lizis maddesi içeren bir reaktif karışımı ekleyin.

ATP de dahil olmak üzere hücresel bileşenleri serbest bırakan bakteriyel lizizi etkinleştirmek için çalkalayarak inkübe edin. ATP, lusiferaz aracılı ışıldayan reaksiyonu yönlendirir.

Bir mikroplaka okuyucu kullanarak lüminesansı kaydedin.

Antibiyotik yüklü şeride maruz kalan bakteri kültürü, antibiyotiklere maruz kalmayan kültüre kıyasla azaltılmış lüminesans sergiler.

Bu azaltılmış lüminesans, antibiyotik yüklü şeridin antibakteriyel etkinliğini doğrular.

İşlenmemiş ve ilaç yüklü UHMWPE şeritlerini üç mililitrelik bir şırıngaya yerleştirin. Daha sonra MHB içeren bakteri süspansiyonunu ekli iğneden 1,5 mililitre işaretine kadar şırıngaya çekin.

Şırınga kurulumunu, belirtilen altı saatlik zaman noktalarına kadar ve ardından yedinci güne kadar her gün çalkalayan bir inkübatöre yerleştirin. Belirtilen her zaman noktasından sonra, şırınga kurulumunu çıkarın ve ortamı iki mililitrelik bir tüpe dağıtın. 100 mikrolitre bakteri süspansiyonu kullanarak makalede açıklandığı gibi gerçek zamanlı bir mikrobiyal canlılık testi gerçekleştirin.