JoVE Encyclopedia of Experiments
Mikrobiyoloji
0 görüntüleme • 1:28 dk • October 30th, 2025
Çok kuyulu bir plakada, ribonükleik asit anti-terminatörünün veya RAT dizisinin akış aşağısında bir floresan raportör geni taşıyan bir plazmit ile dönüştürülmüş bir Corynebacterium glutamicum kültürü alın.
Transkripsiyon sırasında, RAT-RNA, RNA polimerazı bloke eden ve raportör gen ekspresyonunu durduran bir kök ilmek yapısı oluşturur.
Plazmit ayrıca, RAT-RNA bağlayıcı protein, LicT ve mavi ışığa duyarlı VVD alanını içeren bir füzyon proteini olan LicV'yi yapısal olarak eksprese eder.
Karanlıkta, LicV monomerik kalır ve raportör genin transkripsiyonunu bloke eden RAT-RNA kök halkasına bağlanmaz.
LicV dimerizasyonunu tetikleyen VVD alanında konformasyonel bir değişiklik oluşturmak için kültürü mavi ışıkla aydınlatın.
Dimerize LicV, RAT-RNA'ya bağlanır, kök ilmek yapısını açar ve RNA polimerazın raportör geni kopyalamasına izin vererek floresan raportör proteini üretir.
Kültürü floresan mikroskobu altında gözlemleyin.
Mavi ışık aydınlatmasından sonra güçlü raportör floresansı ve karanlıkta minimum floresan, başarılı optogenetik kontrolü doğrular.