Bakterilerde Metabolik Aktiviteyi İzlemek için İzotermal Mikrokalorimetri
JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Mikrobiyoloji
0 görüntülenme • 1:27 dk. • October 30th, 2025
Bir bakteri kültürünün seri seyreltmelerini alın ve büyüme ortamı içeren kalorimetrik şişelere alikotlar ekleyin.
Metabolik ısı üretimini ölçmek için kapalı şişeleri izotermal mikrokalorimetrenin çok kuyulu plakasına yükleyin.
Cihaz, tespit edilen ısının yalnızca bakteri metabolizmasından kaynaklandığından emin olmak için sabit bir sıcaklıkta tutulur.
Bakteriler besinleri metabolize edip çoğaldıkça, sensörlerin gerçek zamanlı olarak algıladığı ısıyı serbest bırakırlar.
Paralel olarak, aynı şişeleri bir inkübatörde inkübe edin. Bir spektrofotometre kullanarak bakteri üremesini izlemek için optik yoğunluğu (OD) ölçün.
Seyreltmelerden gelen kalorimetrik sinyalleri kullanarak bir termal aktivite eğrisi oluşturun ve bunu OD değerleriyle ilişkilendirin.
Keskin bir ilk tepe noktası, üstel büyüme sırasında aerobik solunumu gösterir.
Oksijen sınırlayıcı hale geldikçe, hücreler anaerobik fermantasyona geçerek ikinci bir keskin tepe noktası oluşturur.
Durağan faza girdikten sonra, bakteriler hücre dışı proteinleri parçalamak ve metabolizmayı sürdürmek için enzimler salgılar ve geniş bir tepe noktası oluşturur.
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin