Anaerobik Koşullar Altında Biyoyararlı Cıvayı Tespit Etmek için Bakteriyel Biyosensör Testi

JoVE Encyclopedia of Experiments

Mikrobiyoloji

0 görüntüleme • 4:26 dk • October 30th, 2025

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Anaerobik bir odaya yerleştirilmiş şişeleri içeren bir tahlil kurulumuyla başlayın.

Her şişe, sodyum nitrat, cıva iyonları ve değişen konsantrasyonlarda magnezyum sülfat ile desteklenmiş ortam içerir.

Bileşenleri karıştırmak için kurulumu döndürün, ardından inkübe edin.

İnkübasyon sırasında, magnezyum sülfat, biyolojik olarak kullanılabilir olmayan cıva komplekslerinin oluşumunu teşvik ederek, serbest, biyolojik olarak kullanılabilir cıva iyonlarını konsantrasyona bağlı bir şekilde azaltır.

Ardından, indüklenmiş biyosensörleri, plazmit taşıyan genetiği değiştirilmiş bakterileri ekleyin ve karıştırın.

Plazmit, cıvaya duyarlı bir transkripsiyonel düzenleyici ve bir floresan raportör genine bağlı bir promotör içerir.

Anaerobik koşullar altında, bakteriler solunum için nitrat kullanır.

Serbest cıva iyonları hücrelere girer, transkripsiyonel düzenleyiciyi bağlar ve floresan genini aktive ederek floresan proteinler üretir.

Her şişedeki alikotları çok oyuklu bir plakaya aktarın.

Bir plaka okuyucu kullanarak floresan yoğunluğunu ölçün.

Artan magnezyum sülfat konsantrasyonları ile floresandaki azalma, biyosensörün biyolojik olarak kullanılabilir cıvadaki değişiklikleri tespit etme yeteneğini doğrular.

Deneye başlamadan önce, anaerobik odada oksijen olmadığından emin olmak için anaerobik monitörü kontrol edin. Plaka düzenini 96 oyuklu bir şablona göre tasarlayın. Üçlü teknik kopyalarda deneyler yapmak için bu, şişeleri kurmak için en iyi dörde sekiz ızgara ile temsil edilen 32 farklı işleme izin verecektir.

Dörde sekiz ızgarayı tahlil plakası düzenine göre ayarlayın. Daha sonra tepsiye 7 mililitrelik PTFE standart şişeleri yerleştirin. Şişeler yalnızca şişenin dışını manipüle ederek kullanılmalıdır.

Her tedaviye karşılık gelen her şişeye maruz kalma orta hacmini ekleyin. Her şişeye, plaka düzenine göre test edilecek kimyasal değişkenin karşılık gelen hacmini ekleyin. Şimdi her şişeye nitrat ekleyin, böylece nihai konsantrasyon 200 mikromolar olur.

Yapısal biyosensör işleme boşlukları için bu adımı hariç tutun.

 

Şişelere cıva eklemek için önce dört ila sekiz mikromolar stoğu alın ve iyice çalkalayın. Çalışan bir cıva çözeltisi yapmak için çözeltiyi ve maruz kalma ortamını 7 mililitrelik bir PTFE şişesinde 100 ila 250 nanomolar konsantrasyona seyreltin.

Bu çalışma solüsyonundan, plaka düzenine göre gerekli şişelere cıva ekleyin. Cıva veya kadmiyum ekledikten sonra, plakayı yörünge hareketiyle manuel olarak sallayın. Cıva veya kadmiyumun çözelti içinde türleşmesi için gereken süreye bağlı olarak deney şimdi duraklatılabilir.

Deney yeniden başlatıldığında, homojenliği sağlamak için biyosensör stoğunu yavaşça ileri geri pipetleyin. Daha sonra her şişeye 100 mikrolitre biyosensör stoğu ekleyin ve plakayı daha önce olduğu gibi manuel olarak sallayın. Plaka okuyucuyu 37 santigrat dereceye ısıtın ve her iki nokta beş ila beş dakikada bir okuma ile on saat boyunca kinetik bir çalışma ayarlayın.

Okumalar arasında bir yörünge sarsıntısı, 440 nanometrelik bir floresan uyarımı ve 500 nanometrelik bir emisyon ile floresan ölçümleri almak için çalışmayı ayarlayın. Şimdi dörde sekiz ızgaradaki her PTFE şişesinden 200 mikrolitreyi 96 oyuklu plakanın karşılık gelen kuyucuklarına pipetleyin.

Her 200 mikrolitreyi aktarmadan önce beş kez ileri geri pipetleyin. 96 oyuklu plakayı plaka okuyucunun tepsisine yerleştirin. Ardından kapağı 96 oyuklu plakaya yerleştirin ve teste başlayın.

10:31

Algılama ve Palladium Kurtarma Kentsel Madeninde Altın ve Kobalt Metal Nano Wagon tekerlekli şeklindeki Porların ile Belirlenmiş Yeni Sensörler / adsorbanlar kullanma

İlgili videolar

0 Görüntüler

08:06

Biyomoleküler etkileşimleri algılamak için bir Conductimetric Biyoalgılayıcı β-lactamase tabanlı tahlil kullanımı

İlgili videolar

0 Görüntüler

07:09

Silah kalıntılarının varsayımsal tespiti için yeni bir bakteriyel biyosensörün hazırlanması ve uygulanması

İlgili videolar

0 Görüntüler

09:30

Elektrokimyasal Sensörler kullanarak Bakteriyel Algılama ve Tanıma

İlgili videolar

0 Görüntüler

02:18

Hidrojen sülfür üreten bakterilerin tespiti için hassas bir görsel yöntem

İlgili videolar

0 Görüntüler

02:02

Bakteriyel Biyosensör Kullanarak Hedef Analitin Tespiti

İlgili videolar

0 Görüntüler

01:18

Bakteriyel Biyosensör Kullanılarak İnsan Dışkı Metabolitlerinin Tespiti

İlgili videolar

0 Görüntüler

02:38

Fluorescence-Based Viability Assessment of Oral Anaerobic Bacteria

İlgili videolar

0 Görüntüler

14:04

Antibiyotik Dirençli Stafilokok bakteri tespiti için biyosensör

İlgili videolar

0 Görüntüler

11:26

Deniz Bakterileri ile Ekotoksikolojik Yöntem Çevresel Kirleticilerin Akut Zehirliliğini Değerlendirmek

İlgili videolar

0 Görüntüler

Son güncelleme: 15 Ağustos 2026