İyonik Olmayan Deterjan Faz Ayrımı Kullanılarak Bakteriyel Lipoproteinlerin Zenginleştirilmesi

0 görüntüleme4:16 dk • October 30th, 2025

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Hidrofilik proteinler, lipoproteinler ve protein agregatları içeren bir bakteri lizatı alın.

Daha yüksek sıcaklıklarda faz ayrımı yapabilen soğuk, iyonik olmayan bir deterjan ekleyin.

Buz üzerinde inkübe edin ve periyodik olarak karıştırın. Deterjan, lipoproteinin lipit kısmına bağlanarak protein-deterjan kompleksleri oluşturur.

Faz ayrılmasını sağlamak için karışımı ısıtın. Lipoproteinler deterjan fazında konsantre olurken, hidrofilik proteinler sulu fazda kalır.

Bifazik ayırmayı sürdürmek için oda sıcaklığında santrifüjleyin.

Sulu fazı atın, deterjan fazına soğuk bir tampon ekleyin ve karıştırın.

Lipoproteinleri zenginleştirmek için soğutma, ısıtma ve santrifüjleme döngüsünü tekrarlayın.

Ardından, lipoprotein olmayan agregaları pelet haline getirmek için soğuk tampon ekleyin ve düşük sıcaklıkta santrifüjleyin.

Süpernatanı protein çökeltici bir çözücü içeren bir tüpe aktarın ve lipoproteinleri çökeltmek için sıfırın altındaki sıcaklıkta inkübe edin.

Oda sıcaklığında santrifüjleyin ve süpernatanı atın.

Çökeltilmiş lipoproteinler, sonraki çalışmalar için hazırdır.

Buz gibi soğuk TBSE'ye eşit hacimde %4 yüzey aktif madde ekleyerek süpernatanı TX-114 yüzey aktif madde ile %2'lik bir nihai konsantrasyona kadar destekleyin. Takviye edilen süpernatanı buz üzerinde bir saat inkübe edin, her 15 dakikada bir ters çevirerek karıştırın. Tüpü 37 santigrat derecelik bir su banyosuna aktarın ve faz ayrılmasını sağlamak için 10 dakika inkübe edin.

Bifazik ayırmayı sürdürmek için numuneyi oda sıcaklığında 10 dakika boyunca 10.000 kez g'da santrifüjleyin. Üst sulu fazı yavaşça pipetleyin ve atın. Tüpü orijinal hacmine kadar yeniden doldurmak için alt yüzey aktif madde fazına buz gibi soğuk TBSE ekleyin ve karıştırmak için ters çevirin.

10 dakika buz üzerinde inkübe edin. İnkübasyonun ardından, tüpü 37 santigrat derecelik bir su banyosuna aktarın ve faz ayrılmasını sağlamak için 10 dakika inkübe edin, ardından oda sıcaklığında 10 dakika boyunca 10.000 kez g'da santrifüjleyin. Bu adımları toplam üç ayırma için bir kez daha tekrarladıktan sonra, üst sulu fazı çıkarın ve atın.

Yüzey aktif madde fazına bir hacim buz gibi soğuk TBSE ekleyerek ekstraksiyonlar sırasında oluşan çökeltilmiş protein peletini çıkarın. Çözünmeyen proteini peletlemek için dört santigrat derecede ve 16.000 kez g'da iki dakika santrifüjleyin. Süpernatanı hemen 1.250 mikrolitre %100 aseton içeren 2.0 mililitrelik yeni bir mikrosantrifüj tüpüne aktarın.

Numuneyi ters çevirerek karıştırın ve proteini çökeltmek için gece boyunca eksi 20 santigrat derecede inkübe edin. Ertesi gün, tüpün yönüne dikkat ederek lipoproteinleri peletlemek için numuneyi oda sıcaklığında 20 dakika boyunca 16.000 kez g'da santrifüjleyin. Asetonu boşaltmadan ve numunenin kurumasına izin vermeden önce peleti iki kez %100 asetonla yıkayın.

Daha sonra, 20 ila 40 mikrolitre 10 milimolar Tris-HCL, pH 8.0 ekleyin ve çökeltilmiş lipoproteinlerle duvara karşı yukarı ve aşağı pipetleyerek peleti iyice yeniden süspanse edin.

10:24

Gram-negatif Bakteriler için Hücre Zarfının İç ve Dış Membran Fraksiyonlarına Ayrılması Acinetobacter baumannii için Teknik Ayarlamalar

İlgili videolar

0 Görüntüler

09:26

MALDI-TOF-TOF-MS/MS ve Yukarıdan Aşağıya Proteomik Analiz kullanılarak Escherichia coli'de Antibakteriyel Bağışıklık Proteinlerinin Tanımlanması

İlgili videolar

0 Görüntüler

11:12

Kütle Spektrometrisinden Önce Sağlam Proteom Saflaştırması için Organik Solvent Bazlı Protein Yağışı

İlgili videolar

0 Görüntüler

07:33

Manyetik Aktif Hücre Ayırma (LIMACS) kullanarak Lipid veziküllü aracılı Afinite Kromatografisi: Protein-lipit Etkileşim Analiz Roman Yöntemi

İlgili videolar

0 Görüntüler

02:57

İnsan Kanından Elde Edilen Nötrofillerden Lipitlerin Bifazik Ayırma ile İzolasyonu

İlgili videolar

0 Görüntüler

12:57

Gram-negatif bakterilerin izolasyonu ve Lipid A kimyasal karakterizasyonu

İlgili videolar

0 Görüntüler

11:55

Membran Transport Tek Protein çözünürlükte Oldukça Paralel nanopore çip Sistemi Analiz Süreçleri

İlgili videolar

0 Görüntüler

10:59

Zenginleştirme bakteriyel lipoproteinler ve kütle spektrometresi tarafından yapısal kararlılık için N-terminal Lipopeptides hazırlanması

İlgili videolar

0 Görüntüler

11:10

Deterjan-Alerjik membran proteinlerinin Ultrafast sulandırma tamamlayıcı-Proteoliposomes ücret Fusogenic kullanarak Lipid Bilayers içine.

İlgili videolar

0 Görüntüler

08:43

Bir Well-established organel izolasyon Kit kullanarak hızlı Lipid damlacık yalıtım Protokolü

İlgili videolar

0 Görüntüler

Son güncelleme: 15 Ağustos 2026