İyonik Olmayan Deterjan Faz Ayrımı Kullanılarak Bakteriyel Lipoproteinlerin Zenginleştirilmesi

Hidrofilik proteinler, lipoproteinler ve protein agregatları içeren bir bakteri lizatı alın.

Daha yüksek sıcaklıklarda faz ayrımı yapabilen soğuk, iyonik olmayan bir deterjan ekleyin.

Buz üzerinde inkübe edin ve periyodik olarak karıştırın. Deterjan, lipoproteinin lipit kısmına bağlanarak protein-deterjan kompleksleri oluşturur.

Faz ayrılmasını sağlamak için karışımı ısıtın. Lipoproteinler deterjan fazında konsantre olurken, hidrofilik proteinler sulu fazda kalır.

Bifazik ayırmayı sürdürmek için oda sıcaklığında santrifüjleyin.

Sulu fazı atın, deterjan fazına soğuk bir tampon ekleyin ve karıştırın.

Lipoproteinleri zenginleştirmek için soğutma, ısıtma ve santrifüjleme döngüsünü tekrarlayın.

Ardından, lipoprotein olmayan agregaları pelet haline getirmek için soğuk tampon ekleyin ve düşük sıcaklıkta santrifüjleyin.

Süpernatanı protein çökeltici bir çözücü içeren bir tüpe aktarın ve lipoproteinleri çökeltmek için sıfırın altındaki sıcaklıkta inkübe edin.

Oda sıcaklığında santrifüjleyin ve süpernatanı atın.

Çökeltilmiş lipoproteinler, sonraki çalışmalar için hazırdır.

Buz gibi soğuk TBSE'ye eşit hacimde %4 yüzey aktif madde ekleyerek süpernatanı TX-114 yüzey aktif madde ile %2'lik bir nihai konsan