Negatif İyon Değişim Kromatografisi ile Bir Bakteriyel Proteinin Seçici Saflaştırılması

Seçici protein bağlanması için pozitif yüklü fonksiyonel gruplar içeren bir iyon değiştirici reçine çözeltisi ile başlayın.

Daha sonra, patojenik bakteri Helicobacter pylori'den bir virülans faktörünü aşırı eksprese etmek üzere tasarlanmış konakçı bakteri hücrelerinden elde edilen bir protein özütü alın.

Ekstrakt, pH 8'de bir tamponda konakçı hücre proteinleri ile birlikte hedef virülans faktörünü içerir.

Protein ekstraktını reçine ile karıştırın ve homojen protein-reçine etkileşimini sağlamak için çalkalayarak inkübe edin.

Tampon pH'ından daha düşük izoelektrik noktalara sahip olan konakçı proteinler, negatif yüklü hale gelir ve pozitif yüklü reçineye bağlanır.

Tampon pH'ına yakın bir izoelektrik noktaya sahip olan hedef protein, büyük ölçüde yüksüz kalır ve bağlanmadan kalır.

Protein-reçine bulamacını bir kromatografi kolonuna aktarın ve reçinenin çökmesine izin verin.

Bağlanmamış hedef proteini içeren sıvı fazı toplayın.

Hedef proteinin maksimum geri kazanımını sağlamak için reçineyi tamponla durulayın.

15 mililitre DEAE reçinesi hazırlamak için, 0,6 gram DEAE reçinesi kuru tozunu oda sıcaklığında oda sıcaklığında 30 mililitre Tris-HCl tamponu içinde en az bir gün süspanse edin.

Reçineyi