JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Mikrobiyoloji
0 görüntülenme • 4:28 dk. • October 30th, 2025
Ortama salgılanan polihistidin etiketli bir proteini eksprese eden bir Streptococcus mutans kültürünü ele alalım.
Kültürü santrifüjleyin ve protein açısından zengin süpernatanı toplayın.
Amonyum sülfat ekleyin ve proteinlerin çözünürlüklerini azaltarak çökeltmek için karıştırarak inkübe edin.
Çözeltiyi bir tüpe aktarın, santrifüjleyin ve süpernatanı atın.
Proteini stabilize etmek için peleti tuzlar ve düşük imidazol içeren bağlayıcı tamponda yeniden süspanse edin.
Fazla tuzları gidermek için çözeltiyi taze bağlama tamponuna karşı diyaliz edin.
Çözünmeyen kalıntıları pelet haline getirmek için diyalize edilmiş çözeltiyi santrifüjleyin, ardından süpernatanı filtreleyin.
Süzüntüyü nikel yüklü afinite reçinesi ile karıştırın ve polihistidin etiketli proteinin nikel iyonlarına seçici bağlanmasına izin vermek için inkübe edin.
Karışımı kromatografi kolonuna yükleyin ve bağlanmamış proteinleri çıkarmak için bağlayıcı tamponla yıkayın.
Daha sonra, histidini nikel iyonlarından uzaklaştırmak ve polihistidin etiketli proteini serbest bırakmak için yüksek imidazol içeren bir elüsyon tamponu ekleyin.
Saflaştırılmış proteinleri içeren bu elüatı toplayın.
Bakteri kültürü süspansiyonunu dört santigrat derece
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin