Bakterilerde Antibiyotik Kalıcılığını İncelemek için Mikroakışkan Hızlandırılmış Mikroskopi

Nükleoidi görselleştirmek için floresan etiketli bir DNA bağlayıcı füzyon proteinini eksprese eden katlanarak büyüyen bakteri hücreleriyle başlayın.

Hücreleri önceden hazırlanmış bir mikroakışkan plakanın hücre girişlerine ekleyin.

Ardından, antibiyotik içeren besiyerleri ve antibiyotik içermeyen besiyerleri ayrı solüsyon girişlerine yerleştirin.

Plakayı kapatın, mikroskop aşamasına monte edin ve hızlandırılmış görüntülemeyi başlatın.

İlk olarak, hücreleri kültür odasına yükleyin.

Ardından, üstel hücre büyümesini desteklemek için antibiyotik içermeyen ortamı hazneye perfüze edin.

Son olarak, antibiyotik içeren ortamı tanıtın.

Antibiyotik, çift sarmallı DNA kırılmalarına neden olarak duyarlı hücreleri öldürür. Bu hücreler, stabil floresan ile sıkıştırılmış, replike olmayan nükleoidler sergiler.

İyileşmeyi desteklemek için antibiyotik içermeyen ortama geri dönün.

Kalıcı hücreler - antibiyotik tedavisinden kurtulan küçük bir alt popülasyon - DNA replikasyonunu sürdürür, uzar ve bölünür.

Bu iyileşme, kalıcı hücrelerde floresansın artmasına yol açarak, duyarlı hücrelerden görsel olarak ayırt edilmelerini sağlar.

Koruma solüsyonunu mikroakışkan plakanın her kuyucuğundan çıkarın ve taze kültür ortam