JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Mikrobiyoloji
0 görüntülenme • 3:15 dk. • October 30th, 2025
Negatif kontrollerle birlikte farklı test bileşikleri ile yetiştirilen genetiği değiştirilmiş patojenik bakterileri içeren çok kuyulu bir plaka alın.
Bakteriler, yeşil floresan proteini veya GFP'yi kodlayan bir gene sahip bir plazmit taşır.
Genin promotörü, hücre içi siklik di-GMP veya c-di-GMP konsantrasyonlarına yanıt veren bir protein tarafından aktive edilir.
Plakayı bir plaka okuyucuya yerleştirin.
Optimum floresan sinyal ölçümü ayarlarını yapmak için bir c-di-GMP inhibitörünün olmaması nedeniyle maksimum floresan veren negatif kontrolü kullanın.
Bir test bileşiği c-di-GMP oluşumunu inhibe ederse, hücre içi c-di-GMP seviyesi düşer.
Azalan c-di-GMP seviyeleri, proteinde konformasyonel bir değişikliği tetikleyerek promotörün baskılanmasına ve düşük GFP ekspresyonuna yol açar, bu da floresansın azalmasına neden olur.
Floresansı ölçün ve patojenik bakterilerde hücre içi c-di-GMP seviyelerini modüle eden test bileşiklerini belirlemek için verileri analiz edin.
Spektrofotometrik ölçümden yaklaşık 30 dakika önce, yoğuşmayı önlemek için plaka okuyucuyu 37 santigrat dereceye kadar önceden ısıtın. Okumadan önce hava geçirgen kapak contasını plakadan yavaşça çıkarın.
Ardından, kuyu başına 10 flaş
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin