JoVE Encyclopedia of Experiments
Mikrobiyoloji
0 görüntüleme • 3:09 dk • October 30th, 2025
Bir bakteri kültürü ile başlayın ve hücre yoğunluğunu azaltmak için seri seyreltme yapın.
Son seyreltmenin küçük bir kısmını alın ve bir agar plakasına yerleştirin.
Steril cam boncuklar ekleyin ve iyi izole edilmiş koloniler elde etmek için gerekli olan hücrelerin mekansal olarak ayrılmasını sağlamak için plakayı hafifçe sallayın.
Cam boncukları çıkarın, ardından plakayı ters çevirin ve inkübe edin.
Tek tek hücreler çoğalır ve ayrı koloniler oluşturur ve her koloninin genetik olarak tek tip bir bakteri popülasyonundan oluştuğu bir monoklonal kültür oluşturur.
Tek tek kolonileri seçin ve bunları sıvı bir ortam içeren ayrı tüplere aktarın.
Tüpleri çalkalayarak inkübe edin. İnkübasyon sonrası, her kültürün bulanıklığını değerlendirin.
Ortamda asılı duran bakteri hücreleri ışığı dağıtır ve artan hücre yoğunluğu ile kültürlerin daha bulanık görünmesine neden olur.
Aşağı akış uygulamaları için en yoğun monoklonal bakteri popülasyonunu gösteren en yüksek bulanıklığa sahip tüpü seçin.
100 mililitre LB Lennox Broth ile hazırlanan üç şişeyi bir numara, iki numara ve üç numara ile etiketleyin.
Elde edilen bakteri kültürünün 0.1 mililitresini birinci şişeye pipetleyin. Homojen bir çözelti elde etmek için şişenin kapağını kapatın ve elinizle bir dakika sallayın. Ardından, bir numaralı şişeden iki numaralı şişeye 0,1 mililitre pipetleyin. Tekrar şişenin kapağını kapatın ve bir dakika boyunca elinizle sallayın. Son seyreltmeyi, iki numaralı şişeden üç numaralı şişeye 0,1 mililitre pipetleyerek gerçekleştirin. Şişenin kapağını kapatın ve bir dakika boyunca elinizle çalkalayın.
Daha sonra dört Petri kabının her birine 20 mikrolitre çözelti pipetleyin. Ardından, Petri kaplarının her birine dört adet otoklavlanmış üç milimetre çapında cam boncuk yerleştirin. Petri kaplarının kapaklarını kapatın ve bir dakika boyunca elinizle sallayın.
Bittiğinde, Petri kaplarını ters çevirin ve plakaları 37 santigrat derecelik bir inkübatörde 24 saat inkübe edin.
Paslanmaz çelik bir spatula ile dört Petri kabından elde edilen monoklonal bakterileri seçin ve 12,5 mililitre LB Lennox Et Suyu içeren kalan yedi tüpe koyun. Tüpleri 24 saat boyunca 37 santigrat derece inkübatörde bırakın ve ardından görsel kolorimetrik yöntemi kullanarak en büyük ışık saçılımına sahip olanı seçin.