JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Mikrobiyoloji
0 görüntülenme • 2:07 dk. • October 30th, 2025
Canlı ve ölü Microcystis aeruginosa hücrelerinin ayrı örneklerini alın.
Birleşik bir popülasyon oluşturmak için örnekleri karıştırın.
Microcystis , canlı hücrelerde bozulmadan kalan ancak ölü hücrelerde bozunan bir otofloresan pigment olan fikosiyanin içerir.
Kümeleri kırmak ve tek tip, tek hücreli bir süspansiyon oluşturmak için numuneyi vorteksleyin.
Hücre zarı geçirimsiz, nükleik asit bağlayıcı bir floresan prob ekleyin ve ışıkla ağartmayı önlemek için numuneyi karanlıkta inkübe edin.
Prob, ölü hücrelere hasarlı zarlarından seçici olarak girer ve hücre içi DNA'ya bağlanır.
Uygun uyarma dalga boyu lazerlerini kullanarak fikosiyanin otofloresansını ve nükleik asit probu floresansını ölçmek için numuneyi bir akış sitometresinden geçirin.
Canlı hücreler güçlü fikosiyanin otofloresan yayar ancak prob sinyali göstermez.
Buna karşılık, ölü hücreler azaltılmış pigment emisyonu ve yüksek prob floresansı sergileyerek membran hasarını doğrular.
Bu, pigment açısından zengin canlı hücrelerin ölü hücrelerden tanımlanmasını sağlar.
Moleküler prob hücresi alımını optimize etmek için, önceden hazırlanmış monokültürün yarısını ölü bir kontrol oluşturmak için uygun koşullara maruz bırakın. Kültürün ölümünü
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin