JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Mikrobiyoloji
0 görüntülenme • 3:37 dk. • October 30th, 2025
Membrana bağlı peptidaz NisP'yi eksprese eden bir Lactococcus lactis kültürü alın.
Kültürü besin açısından zengin bir ortamla karıştırın.
Erimiş agar ekleyin, karıştırın ve L. lactis'i agarda eşit olarak dağıtmak için bir tabağa dökün.
Katılaştıktan sonra, agarın içine kuyucuklar açın.
Daha sonra, antimikrobiyal peptit nisin'in vahşi tip veya modifiye edilmiş öncü varyantlarını üreten rekombinant E. coli'yi alın.
Bakterileri peletlemek için santrifüjleyin, süpernatanları atın ve peletleri tamponda yeniden süspanse edin.
Bakterileri parçalamak, santrifüjlemek ve süpernatanları taze tüplere aktarmak için sonikat yapın.
Tutarlı peptit seviyeleri sağlamak için lizatları tampon kullanarak eşit optik yoğunluğa normalleştirin.
Her numuneyi ayrı agar kuyucuklarına pipetleyin ve numuneleri inkübe edin.
İnkübasyon sırasında, Nisin öncü peptitleri agara yayılır ve NisP tarafından parçalanarak olgun nisin üretir.
Olgun nisin, L. lactis'in büyümesini engelleyerek kuyu çevresinde berrak haleler oluşturur.
Nisin varyantlarının antimikrobiyal aktivitesini değerlendirmek için halo boyutlarını karşılaştırın.
Mililitre başına 10 mikrogram kloramfenikol ve yüzde iki glikoz içeren 25 mililitre 2X M17 et suyuna bir
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin