JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Mikrobiyoloji
0 görüntülenme • 2:48 dk. • October 30th, 2025
Kistik fibroz (KF), akciğerlerde kalın, yapışkan mukus birikimine neden olan ve patojenik mikrobiyal büyümeyi destekleyen balgam oluşturan genetik bir hastalıktır.
Yapay KF balgam hazırlamak için temel biyokimyasal özelliklere sahip solüsyonlar alın.
Müsin karışımı, CF balgam viskozitesini çoğaltmak ve mikrobiyal yapışmayı teşvik etmek için yüksek moleküler ağırlıklı glikoproteinler olan müsinler içerir.
Kimyasal karışım, mikrobiyal metabolizmayı desteklemek için iyonlar ve glikoz sağlar.
Biyolojik karışım, mikrobiyal büyüme için besin sağlar.
Yapay balgam ortamını (ASM) oluşturmak için hepsini birleştirin.
Patojenin hayatta kalmasını destekleyen hafif asidik pH'ı korumak için bir tamponlama maddesi ekleyin.
Orta sterilizasyon için ASM'yi membran filtreli bir vakumlu filtreleme odasına aktarın.
Müsin toplanmasını önlemek ve filtrenin tıkanmasını önlemek için çalkalama altında filtreleyin.
Vakum, ortamı filtreden çekerek mikrobiyal kirleticileri ve makromoleküler agregaları giderir.
ASM, CF ile ilişkili mikropların kültürlenmesi için hazırdır.
ASMM içeren 1 litrelik şişeye 250 mililitre ASCM ekleyerek yapay bir balgam ortamı hazırlayın. Ardından, orta boy şişeye 250 mililitre ASBM ekleyin. Bir pH kağıdında 6,3 pH'a ulaşmak için ortamı bazik 1 molar MOPS tamponu ile titre edin.
Yapay balgam ortamını süzülene kadar 4 santigrat derecede soğutun. Ardından, filtrasyon işlemini başlatmak için 200 mililitre filtrelenmemiş suni balgam ortamını 0,22 mikrometre gözenek boyutu filtreli bir vakumlu filtrasyon sistemine aktarın. Filtrasyon sistemini vakum pompasına bağladıktan sonra vakum pompasını açın. Ardından, hazneyi 4 santigrat derecede soğuk bir odada dakikada 90 devirle çalkalayarak bir yörünge çalkalayıcıya yerleştirin.
Tıkanma sorununun üstesinden gelmek için 350 mililitre ortam filtrelendikten sonra filtreyi değiştirin. Önemli bir miktar süzüldükten sonra, filtrasyon için fazladan 150 mililitre ortam ekleyin. Tüm ortam filtrelenene kadar filtrelemeyi ek odalarla tekrarlayın.