JoVE Encyclopedia of Experiments
Mikrobiyoloji
0 görüntüleme • 2:17 dk • October 30th, 2025
Trakeası açıkta olan ötenazi uygulanmış bir fareyle başlayın. Farenin akciğerleri, patojenik bir bakteri olan tiplendirilemeyen Haemophilus influenzae ile önceden enfekte olmuştu.
Trakeaya bir kateter yerleştirin ve yıkama tamponu ile dolu bir şırıngaya takın.
Kan pıhtısı oluşumunu önlemek için bir antikoagülan ve hücre bütünlüğünü korumak için bir şeker içeren yıkama tamponunu uygulayın.
Kırmızı kan hücreleri, bağışıklık hücreleri ve kalıntı patojenler içeren bronkoalveoler lavaj sıvısını geri kazanmak için nazikçe aspire edin.
Prosedürü tekrarlayın ve geri kazanılan lavaj sıvısını tek bir süspansiyonda toplayın.
Havuzlanmış süspansiyondan bir alikot alın ve hücreleri ayırmak için santrifüjleyin. Süpernatanı atın.
Kırmızı kan hücrelerini seçici olarak parçalamak için hücreleri bir lizis tamponunda yeniden süspanse edin.
Kalan hücreleri ayırmak ve süpernatant içeren kalıntıları atmak için santrifüjleyin.
Kalan hücreleri bir arabellekte yeniden askıya alın.
Bağışıklık hücreleri ve kalıntı bakteriler içeren nihai süspansiyon, aşağı akış analizi için hazırdır.
Trakeaya erişmek için akciğerin ventral kısmını açığa çıkarın. Trakeayı 20 gauge kateterle entübe edin.
Kateteri kullanarak 0,8 mililitre BALF tamponu damlatın ve lavajı diş aspirasyonu ile toplayın. Dört lavaj koleksiyonunu tek bir süspansiyonda toplayarak bu prosedürü üç kez daha tekrarlayın.
100 mikrolitrelik bir alikot alın ve 2.000 RPM'de iki dakika aşağı dönün.
Süpernatanı çıkarın ve RBC lizis tamponunda yeniden süspanse edin. Döndürün ve peleti 1X PBS ile yeniden askıya alın.