Hücresiz Bir Sistem Kullanılarak Nanodisk ile Stabilize Edilmiş Membran Protein Antijenlerinin Sentezi

Bozulmamış hücresel yapılardan yoksun, ancak in vitro transkripsiyon ve translasyon için gerekli moleküler bileşenleri koruyan bakteri hücresiz bir sistemi ele alalım.

Sentetik fosfolipidler ve polimerlerle birlikte membran protein antijenini ve iskele proteinini kodlayan plazmitleri tanıtın.

Protein sentezini başlatmak için karışımı ATP, GTP ve bir amino asit karışımı ile destekleyin.

Eş zamanlı olarak amino asit karışımıyla zenginleştirilmiş bir yem çözeltisi hazırlayın.

Karışımı iç hazneye ve besleme solüsyonunu çift bölmeli diyaliz cihazının dış haznesine yükleyin.

İnkübasyon sırasında, substratlar yarı geçirgen zar yoluyla dış odadan iç odaya yayılarak plazmit transkripsiyonunu ve protein translasyonunu kolaylaştırır.

İskele proteini, fosfolipidleri ve polimerleri lipid nanodiskler halinde birleştirir ve MPA'nın bu yapılara katlanmasını ve dahil edilmesini kolaylaştırır.

Reaksiyon sırasında üretilen yan ürünler dış odaya yayılarak nanodiskle stabilize edilmiş MPA oluşumu için en uygun koşulları korur.

MOMP-tNLP'leri hücresiz bir yöntem kullanarak hazırlayın.

Reaksiyonu ayarlamadan iki saat önce hücresiz protein ekspresyon kitinden sulandırma tamponunu çözün ve tampona EDTA içermeyen pr