JoVE Encyclopedia of Experiments
Mikrobiyoloji
0 görüntüleme • 2:15 dk • September 26th, 2025
Plastoglobüller, siyanobakterilerin sitoplazmasında lipid açısından zengin damlacıklardır.
Nötr lipidleri, gömülü yapısal ve enzimatik proteinlere sahip amfipatik bir lipid tek tabakası ile çevrili hidrofobik bir çekirdek içinde depolarlar. Depolanan lipitler, hücresel fonksiyonları desteklemek için stres sırasında harekete geçirilir.
Bunları izole etmek için, siyanobakterilerden elde edilen ham bir plastoglobül fraksiyonu ile başlayın. Bu fraksiyon plastoglobüller açısından zenginleştirilmiştir ve bazı kalıntı kirletici proteinler içerir.
Bu fraksiyonu daha yoğun bir sakaroz çözeltisiyle karıştırın ve bir ultrasantrifüj tüpüne aktarın.
Süreksiz bir yoğunluk gradyanı oluşturmak için daha hafif bir sakaroz çözeltisi ile kaplayın.
Plastoglobüllerin termal bozulmasını önlemek için soğuk koşullar altında yüksek hızda santrifüjleyin.
Gradyan, bileşenleri yoğunluğa göre ayırır: Lipid açısından zengin, düşük yoğunluklu plastoglobüller en üste çıkarken, daha yoğun, protein açısından zengin kirleticiler batar.
Saflaştırılmış plastoglobülleri toplayın ve yapılarını korumak için dondurucu bir ortamda hızlı dondurun.
Uzun süreli kullanım için ultra düşük sıcaklıklarda saklayın.
Siyanobakterilerden saf plastoglobülleri hasat etmek için, daha önce bahsedildiği gibi, 500 mikrolitre ham plastoglobül, 750 mikrolitre ortam R 0.7 ve 750 mikrolitre ortam R 0.2 kullanarak bir sükroz gradyanı oluşturun. Santrifüjlemeden sonra, saf plastoglobülleri 1.5 mililitrelik bir tüpte toplayın ve saf plastoglobülleri ayırın. Bittiğinde, saf plastoglobül alikotlarını sıvı nitrojen içinde hızlı dondurun ve doğrudan eksi 80 santigrat derecede saklayın veya kuru bir toz haline getirin.