Konakçı-Bakteri Etkileşimlerindeki Değişkenliği Değerlendirmek için Bireysel Solucanların Mekanik Bozulması

JoVE Encyclopedia of Experiments

Mikrobiyoloji

0 görüntüleme • 5:09 dk • October 30th, 2025

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Tamponda asılı, geçirgen tırnak etlerine sahip, yaşları uyumlu, steril, yeni öldürülmüş yetişkin C. elegans solucanları ile başlayın.

Bu solucanlar bağırsak yollarında bakterilerle enfekte olurlar.

Tamponda aşındırıcı parçacıklar içeren derin kuyulu bir plaka alın ve her kuyucuğa tek bir solucan aktarın.

Plakayı sızdırmazlık filmi ve bir kapakla örtün.

Doku bozulması sırasında aşırı ısınmayı önlemek için plakayı düşük sıcaklıkta inkübe edin.

Kuyucukları kapatmak için kapağa basın.

Bir doku bozucu kullanarak plakayı mekanik olarak sallayın. Aşındırıcı parçacıklar solucan dokularını bozarak bağırsak bakterilerini serbest bırakır.

Plakaya dokunun ve içindekileri peletlemek için santrifüjleyin.

Bakterileri eşit olarak dağıtmak için içeriği karıştırın, ardından taze kuyucuklara aktarın.

Bakteriyel süspansiyonu tampon içinde seri olarak seyreltin.

Seyreltmeleri agar plakalarına yerleştirin ve koloni oluşumuna izin vermek için inkübe edin.

Tek tek solucanlar arasında bağırsak bakteri yüklerindeki değişimi ölçmek için kolonileri sayın.

Solucanların mekanik olarak bozulmasına hazırlanmak için, steril iki mililitre derinliğinde 96 oyuklu bir plaka ve bir silikon plaka kapağı elde edin.

Izgara kuyunun dibini zar zor kaplayacak şekilde her bir oyuğa az miktarda steril 36 ızgara silisyum karbür eklemek için steril bir kepçe spatula kullanın. Her kuyucuğa 180 mikrolitre M9 solucan tamponu ekleyin. Sütunları ve satırları etiketleyin ve ardından plakayı silikon plaka kapağıyla gevşek bir şekilde kapatın.

Daha sonra geçirgen solucanları bir santimetre derinliğe kadar doldurulmuş M9TX-01 içeren küçük bir Petri kabına aktarın. Bir diseksiyon mikroskobu kullanarak, 20 mikrolitrelik hacimlerde tek tek solucanları pipetleyin ve bunları 96 oyuklu plakanın ayrı kuyucuklarına aktarın. Pipete yapışan solucanları çıkarmak için, Petri kabının açık bir alanından 20 mikrolitre M9TX-01 aspire edin ve tekrar tabağa bırakın. Tüm solucanlar aktarıldıktan sonra, 96 oyuklu plakayı, kağıt destekli tarafı numune kuyucuklarına bakacak şekilde bir esnek sızdırmazlık filmi tabakasıyla örtün.

Silikon sızdırmazlık matını, kapağı kuyucuklara bastırmadan esnek sızdırmazlık filminin üzerine hafifçe yerleştirin. Kesinti sırasında aşırı ısınmayı önlemek için plakayı 30 ila 60 dakika boyunca dört santigrat dereceye yerleştirin. Plakayı soğuttuktan sonra, silikon sızdırmazlık matını kuyucuklara sıkıca bastırarak kapatın.

Ardından plakaları doku bozucuya sabitleyin. Plakaları 30 hertz'de bir dakika çalkalayın. Ardından plakaları 180 derece döndürün ve bir dakika boyunca çalkalamayı tekrarlayın.

Esnek sızdırmazlık filmindeki kumları çıkarmak için plakaları tezgaha iki veya üç kez sıkıca vurun. Kuyucukların dibindeki numuneleri toplamak için plakaları iki dakika boyunca 2.400 kez g'da santrifüjleyin. Ardından silikon kapağı çıkarın ve sızdırmazlık filmini çekin.

Solucan sindirimlerinin on kat seri seyreltmesini hazırlamak için, 96 oyuklu bir plakanın B ila D sıralarına 180 mikrolitre bir X PBS doldurun. 200 mikrolitreye ayarlanmış çok kuyulu bir pipetleyici kullanarak, solucan sindirimini pipetleyerek yavaşça karıştırın. Maksimum sıvı miktarını PBS içeren 96 oyuklu plakanın A sırasına aktarın.

Çok kanallı bir pipet kullanarak üst sıradan 20 mikrolitre çıkarın ve B sırasına dağıtın, ardından karıştırın. 1000 kat seyreltme elde etmek için bu adımı B'den C'ye ve ardından C'den D'ye kadar olan sıralar için tekrarlayın. Mono-kolonize solucanların bakteriyel miktar tayini için, katı agar plakaları üzerine her seyreltmenin 10 ila 20 mikrolitresini plakalayın. Çok türlü kolonizasyon için, 10 santimetrelik agar plakalarına her seyreltmeden 100 mikrolitre plakalayın.

08:19

Nanoakışkan Teknoloji Kullanarak Tek ve Toplu C. elegans Örneklerinde Yüksek Verimli Nicel RT-PCR

İlgili videolar

0 Görüntüler

09:47

Bağırsak Mikrobiyom Bakterileri İçin Zenginleştirmek için Yabani Caenorhabditis Nematodlarının Seçici Temizliği

İlgili videolar

0 Görüntüler

11:40

Caenorhabditis elegans Health Üzerinde Etkisi Olan Mikrobiyal İzolatların Yüksek Verimli Taraması

İlgili videolar

0 Görüntüler

03:22

Mikropsuz C. elegans'de Bağırsak Bakteri Kolonizasyonunun Değerlendirilmesi

İlgili videolar

0 Görüntüler

02:45

Mikrop-Solucan Etkileşimlerini İncelemek İçin Yüksek Verimli Floresan Tahlil

İlgili videolar

0 Görüntüler

02:05

C. elegans Sıvı Toksisite Testi ile Bakteriyel Virulansın Değerlendirilmesi

İlgili videolar

0 Görüntüler

04:15

Detecting Bacterial Virulence Using Amoeba as a Host System

İlgili videolar

0 Görüntüler

11:18

Otomatik Ayırma C. elegans Değişken derecelerde Bakteriyel Patojen tarafından kolonileştirildiğini

İlgili videolar

0 Görüntüler

11:58

Nematot Caenorhabditis Elegans - konak-mikrop etkileşimleri çalışmaya çok yönlü Vivo içinde manken

İlgili videolar

0 Görüntüler

09:00

Boyuna Imaging'de Caenorhabditis elegans için bir mikrosıvısal Platform

İlgili videolar

0 Görüntüler

Son güncelleme: 15 Ağustos 2026