Konakçı-Bakteri Etkileşimlerindeki Değişkenliği Değerlendirmek için Bireysel Solucanların Mekanik Bozulması

Tamponda asılı, geçirgen tırnak etlerine sahip, yaşları uyumlu, steril, yeni öldürülmüş yetişkin C. elegans solucanları ile başlayın.

Bu solucanlar bağırsak yollarında bakterilerle enfekte olurlar.

Tamponda aşındırıcı parçacıklar içeren derin kuyulu bir plaka alın ve her kuyucuğa tek bir solucan aktarın.

Plakayı sızdırmazlık filmi ve bir kapakla örtün.

Doku bozulması sırasında aşırı ısınmayı önlemek için plakayı düşük sıcaklıkta inkübe edin.

Kuyucukları kapatmak için kapağa basın.

Bir doku bozucu kullanarak plakayı mekanik olarak sallayın. Aşındırıcı parçacıklar solucan dokularını bozarak bağırsak bakterilerini serbest bırakır.

Plakaya dokunun ve içindekileri peletlemek için santrifüjleyin.

Bakterileri eşit olarak dağıtmak için içeriği karıştırın, ardından taze kuyucuklara aktarın.

Bakteriyel süspansiyonu tampon içinde seri olarak seyreltin.

Seyreltmeleri agar plakalarına yerleştirin ve koloni oluşumuna izin vermek için inkübe edin.

Tek tek solucanlar arasında bağırsak bakteri yüklerindeki değişimi ölçmek için kolonileri sayın.

Solucanların mekanik olarak bozulmasına hazırlanmak için, steril iki mililitre derinliğinde 96 oyuklu bir plaka ve bir silikon plaka kapağı elde edin.

Izgara kuyunun dib