Legionella pneumophila'da Bir Salgı Sistemi Bileşeninin Polaritesinin ve Dinamiğinin Ölçülmesi

Konakçı enfeksiyonu için gerekli olan floresan etiketli bir salgı sistemi bileşenini eksprese eden bir solunum yolu patojeni olan Legionella pneumophila ile başlayın.

Bu bileşenlerin polaritesini ölçmek için floresan görüntüleri elde edin ve tek tek hücreleri ayırt etmek için kontrastı ayarlayın.

Floresan gradyanlarını ölçmek için hücre kutbundan sitoplazmaya doğru dikdörtgen bölgeler yerleştirin.

Ortalama yoğunluğu ve varyansı çıkarmak için bu bölgeleri maskeleyin, ardından polarite puanlarını varyans-ortalama yoğunluk oranları olarak hesaplayın.

Yüksek polarite puanları, bileşenlerin bakteri kutuplarında hedeflenen işe alındığını gösterir.

Dinamik ölçümler için iki hızlandırılmış görüntü yakalayın ve hücreleri net bir şekilde görselleştirmek için kontrastı ayarlayın.

Sitozolik floresansı ölçmek için hücre merkezine kare bölgeler yerleştirin.

Fotoağartmayı düzeltmek için tüm hücreleri maskeleyin ve gürültü çıkarma için hücreler arasındaki arka plan bölgelerini tanımlayın.

Tüm yoğunlukları dışa aktarın ve zaman içinde floresandaki değişimi hesaplayın.

Artan yoğunluk kümelenmeyi gösterirken, azalan yoğunluk bakteri içindeki salgı bileşenlerinin dinamik yeniden dağılımını yansıtır.

Polariteyi