JoVE Encyclopedia of Experiments
Mikrobiyoloji
0 görüntüleme • 2:03 dk • October 30th, 2025
Patojenik bir bakteri olan Legionella pneumophila kültürü ile başlayın.
Bu bakteri hücreleri, zarlarında konakçı enfeksiyonu için gerekli olan bir salgı sistemine sahiptir.
Kriyojenik elektron tomografisi (kriyo-ET) görüntüleme için gerekli yoğunluğu elde etmek için bakteri hücrelerini steril suda askıya alın.
Üç boyutlu yeniden yapılandırma sırasında görüntü hizalaması için referans noktaları görevi gören altın nanopartikülleri ekleyin.
Bakteri örneğini biriktirmek için delikli karbon filmli bir ızgara alın.
Izgarayı gazla dolu bir haznenin içine yerleştirin ve yüzeyi daha hidrofilik hale getirmek için elektrik deşarjı uygulayın.
Süspansiyonu ızgaraya uygulayarak sıvının yüzeye eşit şekilde yayılmasını ve hücrelerin yerleşmesini sağlayın.
Numuneyi dondurmak ve hücresel mimarisini korumak için fazla suyu ızgaradan çıkarın ve sıvı bir dondurma ortamına daldırın.
Numune artık bakteri salgı sisteminin kriyo-ET görüntülemesi için hazırdır.
Elektron kriyotomografi örneğini hazırlamak için, CYE-agar-streptomisin plakaları üzerinde 37 santigrat derecede 48 saat boyunca ağır bir Legionella Pneumophila yaması büyütün.
Hücreleri suda yaklaşık 0,7'lik bir OD600'e kadar yeniden süspanse edin. Daha sonra 20 mikrolitre hücre süspansiyonuna beş mikrolitre kolloidal altın parçacıkları ekleyin. Glow, delikli bir karbon ızgarayı boşaltır ve üzerine beş mikrolitre hücre karışımını pipetler.
Bir dakika bekletin. Izgarayı filtre kağıdıyla kurulayın ve yerçekimiyle çalışan bir piston aparatı kullanarak sıvı etan içinde dondurun.