Bakteriyel Ham Hücre Ekstraktı Kullanılarak Hücresiz Protein Ekspresyonu

Hücresiz bir protein ekspresyon sistemi, in vitro transkripsiyon ve translasyon için gerekli moleküler mekanizmayı içeren bakteriyel bir ham hücre lizatı kullanır.

Bu lizat, transkripsiyon faktörlerini, ribozomları ve transfer RNA'larını (tRNA'lar) içerir.

Lizata bir DNA şablonu, RNA polimeraz, nükleotidler ve amino asitler içeren bir karışım ekleyin.

Duvarlara yapışan sıvıyı toplamak için bir PCR plakasına aktarın ve santrifüjleyin. Buharlaşmayı önlemek için plakayı kapatın.

Hücresiz protein ekspresyonunu desteklemek için bir termal döngüleyicide optimum sıcaklıkta inkübe edin.

Transkripsiyon faktörü, şablon DNA'ya bağlanan bir kompleks oluşturmak için RNA polimeraz ile birleşir.

Bu kompleks, bir haberci RNA (mRNA) oluşturmak için nükleotidleri birleştirerek RNA sentezini katalize eder.

mRNA, translasyonu başlatan ribozomları işe alır ve bu sırada tRNA'lar bir polipeptit zinciri oluşturmak için karşılık gelen amino asitleri iletir.

Polipeptit, aşağı akış uygulamaları için hazır, fonksiyonel bir proteine katlanır.

DNA şablonunu kullanarak hücresiz protein ekspresyonu gerçekleştirmek için 10X enerji çözeltisi ana karışımını, 4X amino asit ana karışım alikotlarını ve DNA şablonunu oda sıcaklı