JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Mikrobiyoloji
0 görüntülenme • 3:20 dk. • October 30th, 2025
Sıvı akışı ve atıkların uzaklaştırılması için pompa kontrollü konektörlere sahip bir mikroakışkan çip içeren bir mikro damlacık kültür odası ile başlayın.
Haznenin içine yağ ile kaplanmış bir bakteri süspansiyonu içeren bir reaktif şişesi yerleştirin.
Şişenin üst borusunu bir pompa portuna ve yan boruyu bir çip konektörüne bağlayın. Hazneyi kapatın.
Büyüme eğrisi parametrelerini ayarlayın. Daha sonra damlacık oluşumunu başlatın.
Yağ ve bakteri süspansiyonu T-bağlantısında birleşirken, yağ kesme, sulu bakteri fazını tekdüze, bakteri kapsülleyen mikro damlacıklara ayırır.
Damlacık oluşumundan sonra şişeyi çıkarın, çip konektörünü pompa portuna bağlayın ve hazneyi kapatın.
Her damlacık algılama yolundan geçerken, bir fiber optik prob, bakteri konsantrasyonunu temsil eden optik yoğunluğunu ölçer.
Bakteri üremesine izin vermek için mikro damlacıkları ileri geri hareket ettirin.
Zamanla optik fiber, damlacığın optik yoğunluğunu ölçerek bir büyüme eğrisi oluşturur.
Şırınga iğnesinden yan tüpe reaktif şişesine üç ila beş mililitre MMC yağı enjekte etmek için 10 mililitrelik steril bir şırınga kullanın. Ardından, yağın iç duvara tamamen sızmasını sağlamak için reaktif şişesini yavaşça eğin ve döndürün.
Şişeye beş mililitre başlangıç bakteri solüsyonu enjekte ettikten sonra, beş ila yedi mililitre MMC yağı enjekte ederek reaktif şişesini doldurun. Numune enjeksiyon işlemini tamamlamak için reaktif şişesinin bağımsız hızlı konektörünü A dışarı çekin ve hızlı bağlantı A'yı şişenin hızlı konektörü B'ye takın. İşiniz bittiğinde, reaktif şişesini metal banyoya koymak için operasyon odasının kapısını açın.
Çipin C2 konektörünü ve reaktif şişesinin hızlı konektörünü A dışarı çekin. Reaktif şişesinin yan tüp konnektörünü C2 konnektörüne ve üst tüp konnektörünü O2 konnektörüne bağlayın. Daha sonra ameliyat odasının kapısını kapatın.
Büyüme eğrisi ölçümünün işlevini seçmek için Büyüme Eğrisi'ne tıklayın. Parametre ayar arayüzünde Sayıyı 15 olarak girin. Ardından, OD algılama anahtarını açın ve Dalga Boyunu 600 nanometre olarak ayarlayın. Damlacık üretimini başlatmak için Başlat sekmesine tıklayın.
İşlemin tamamlanması 15 dakika sürecektir.
Ana arayüzde bir mesaj isteyen bir açılır pencere göründüğünde, reaktif şişesini çıkarmak ve C2 ve O2 konektörlerini bağlamak için operasyon odasının kapısını açın. Kapıyı kapattıktan sonra, OK Damlacıkları otomatik olarak yetiştirmek ve OD değerlerini algılamak için açılır penceredeki düğmesine basın.
Büyüme eğrisi durağan aşamaya ulaştığında, OD verilerini dışa aktarmak için Veri Dışa Aktarma düğmesini tıklatın. Veri kaydetme yolunu seçin ve yetiştirme dönemi boyunca kaydedilen OD değerini nokta CVS formatında dışa aktarın. Büyüme eğrisini çizmek için Excel ve Origin 9.0 gibi haritalama yazılımlarını kullanın.