JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Mikrobiyoloji
0 görüntülenme • 4:37 dk. • October 30th, 2025
İpliksi bir siyanobakteri olan Phormidium lacuna kültürünü ele alalım.
Filamentleri dağıtmak için kültürü homojenize edin, ardından bakterileri peletlemek için santrifüjleyin.
Süpernatanı atın ve peleti besin açısından zengin ortamda yeniden süspanse edin.
Antibiyotik takviyeli bir agar plakasına yeşil floresan proteini ve antibiyotik direnç genleri içeren plazmit DNA ekleyin.
Bakteri süspansiyonunu DNA'nın üzerine ekleyin ve ışık koşullarında inkübe edin.
Bakteriler, tip IV pili kullanarak DNA'yı içselleştirir. Tanıtılan genler, bakteri genomunun çoklu kopyalarından birine entegre olur.
Dönüştürülmüş bakterileri seçmek için bakterileri antibiyotik takviyeli bir agar plakasına yeniden dağıtın.
Işık mikroskobu altında, başarılı dönüşümü gösteren sağlıklı, yeşil filamentleri tanımlayın.
Dönüştürülen popülasyonu zenginleştirmek için seçilen filamentleri daha yüksek antibiyotik konsantrasyonuna sahip sıvı ortama aktarın.
Yine, transformantları ayırmak için daha yüksek antibiyotik seviyelerine sahip agar üzerine plakalayın.
Başarılı dönüşümü doğrulamak için GFP ekspresyonunu floresan mikroskobu altında görselleştirin.
Çalışan bir kültürden bir mililitre P. lacuna filamentleri ile iki 250 mililitre
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin