JoVE Encyclopedia of Experiments
Mikrobiyoloji
0 görüntüleme • 2:44 dk • October 30th, 2025
Phormidium lacuna filamentlerinin bir kültürüyle başlayın.
Filament kümelerini parçalamak ve düzgün bir süspansiyon oluşturmak için kültürü kısaca homojenize edin.
Homojenize edilmiş numuneyi bir Petri plakasına aktarın ve dinlenmeye bırakın.
Buharlaşmayı azaltmak için plakayı selofanla örtün.
Destek platformu olarak hizmet etmesi için mikroskop tablasına bir slayt yerleştirin.
Numuneyi içeren plakayı doğrudan slaytın üstüne yerleştirin.
Düşük güçlü bir objektif merceği kullanın ve hareketlerini gözlemlemek için ortamda asılı duran bakteri filamentlerine odaklanın.
Filamentler, iç zarda bir araya getirilen ve dış zardan çıkan mikroskobik lifler olan tip IV pili tarafından yönlendirilen yüzey boyunca yavaş, kayma hareketi sergiler.
Bu lifler, hücreleri öne doğru çekmek için uzar ve geri çekilir ve kaymalarını sağlar.
Bu tahlil, Phormidium lacuna'nın sıvı bir ortamda karakteristik kayma hareketliliğini ortaya koymaktadır.
P. lacuna'yı F2 ortamında, 750 nanometrede tahmini optik yoğunluk 0,35 olana kadar yaklaşık beş gün boyunca beyaz ışıkta 50 RPM yatay çalkalama altında yetiştirin. Numuneyi dört santigrat derecede saklayın. Filamentleri ultrason ile maksimum güçte ve bir döngüde bir dakika boyunca homojenize edin.
Optik yoğunluğu 750 nanometrede ölçün ve P. lacuna içeren ortamın sekiz mililitresini altı santimetrelik bir Petri kabına aktarın. Numune oda sıcaklığına ulaşana kadar birkaç dakika bekleyin ve ardından Petri kabını selofan folyo ile kapatın. Kameralı standart bir mikroskobun XY masasına bir mikroskop lamı yerleştirin.
Mikroskop ışığını açın ve 4X veya 10X objektifi ışığın yoluna taşıyın. Ardından, Petri kabını slaydın üstüne yerleştirin. Tekli filamentleri veya filament demetlerini tablonun X, Y ve Z hareketleriyle ayarlayın.
Tek filamentlerin veya demetlerin hareketlerini gözlemleyin ve hareketleri standart bir mikroskop kamerası ile kaydedin. Objektif merceğin sıvıya temas etmediğinden emin olun.