Homolog Rekombinasyon Yoluyla Siyanobakterilerde Antibiyotik İşaretli Mutantların Üretilmesi
JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Mikrobiyoloji
0 görüntülenme • 4:14 dk. • October 30th, 2025
Bir siyanobakteri kültürü ile başlayın.
Kültürü santrifüjleyin, ardından bakteri yüzey pilisini korumak için peleti nazikçe yıkayın.
Tekrar santrifüjleyin, peleti taze ortamda yeniden süspanse edin ve bir tüpe aktarın.
Antibiyotik direnç geni ile replikasyon yapmayan bir vektör tanıtın. Bu gen, bakteri genomundaki bir hedef genin yukarı ve aşağı akışında bulunan bölgelere homolog olan DNA dizileri ile çevrilidir.
Homolog dizilerle hizalanan ve rekombinasyon yoluyla hedef genin yerini alan plazmidin pili aracılı içselleştirilmesine izin vermek için inkübe edin, böylece bir mutasyon meydana gelir.
Hücreleri agar üzerine yayın ve inkübe ederek antibiyotik direnç geninin bir direnç proteini eksprese etmesine izin verin.
Agar yüzeyini antibiyotik içeren agar ile kaplayın ve inkübe edin. Mutant hücrelerdeki direnç proteini, antibiyotiği etkisiz hale getirerek hayatta kalmalarını ve koloni oluşumunu kolaylaştırır.
Hayatta kalan kolonileri seçin ve antibiyotiğe dirençli mutantları ayırmak için bir antibiyotik içeren agar üzerinde yeniden çizin.
Metin protokolüne göre ortam, siyanobakteri suşları ve plazmitleri hazırladıktan sonra, siyanobakteri hücreleriyle dolu bir döngüyü 30 ila 50 mililitre BG1
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin