JoVE Encyclopedia of Experiments
Mikrobiyoloji
0 görüntüleme • 2:34 dk • November 28th, 2025
Ateş stresli farelerden alınan hematoksilin ve eozin boyalı bağırsak kesitleriyle başlayın; biri oral olarak tampon ile kontrol amaçlı ön işlem, diğeri ise Bacillus subtilis süspansiyonu ile uygulanır.
Isı stresi, bağırsak sıkı bağlantı proteinlerine zarar verir, bu da villüslerin ve mukozal inceltliğin azalmasına yol açar.
Bakteriyle ön tedavi, sıkı birleşim proteinlerini stabilize eden sinyal moleküllerinin salınmasını teşvik eder; böylece villus yüksekliği ve mukozal kalınlık korunur.
Villus yüksekliğindeki farkları tespit etmek için yüksek çözünürlüklü ışık mikroskobu altındaki bölümleri gözlemleyin.
Sonra, her fareden bir damla taze kan cam slaytlara koyun ve örtü örtüleriyle örtün.
Isı stresi, eritrosit zarlarını dengesizleştirir ve mikrovezikülleri kan dolaşımına salgılar.
Bakteriler, sistemik oksidatif stresi azaltır, eritrosit membranlarını stabilize eder ve vezikülasyonu en aza indirir.
Vezikülasyon farklılıklarını değerlendirmek için kan örneklerini yüksek çözünürlüklü ışık mikroskobu altında gözlemleyin.
Bağırsak bölümünde korunmuş villus yüksekliği ve kandaki daha az mikrovezikül, bakterilerin ısı stresi altında koruyucu etkisini doğrular.
Metin protokolüne göre ince bağırsak bölümleri hazırlanıp boyandıktan sonra, bağırsak villuslarını ve toplam mukozal kalınlığını ölçmek için yüksek çözünürlüklü mikroskop kullanın. Her sıçandan en az dört örnek analiz edin ve her örnekte en az 20 ölçüm yapın.
Kan örneklerinin yüksek çözünürlüklü ışık mikroskopisi yapmak için, titreşim izolasyon platformunu mikroskop sistemi için bir temel olarak kullanarak video kamera ve bilgisayar ile canlı görüntüler kaydedilir. Test görüntülerini metin protokolüne göre kalibre ettikten sonra, her sıçandan yeni alınan yedi mikrolitre kanı cam slayta yerleştirin ve bir kapak kuşağı ekleyin. Sonrasında, her örnekte 72 x 53,3 mikrometre kare boyutlarında on görüntü karesini fotoğraflayıp kaydedin.
Son olarak, gerçek zamanlı yüksek çözünürlüklü doğrudan optik görüntüler sağlayan yazılımlar kullanılarak veziküllerin konsantrasyonunu ölçür.