JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Mikrobiyoloji
0 görüntülenme • 2:45 dk. • November 28th, 2025
C . elegans solucanları içeren bir tüple başlayın.
Solucanları, kontrol bakterisi veya test bakterisi içeren besin açısından zengin agaroz ortamı içeren çoklu kuyu tabakasına aktarın.
Kuluçka sırasında solucanlar bağırsak epitelini kolonileştiren bakterileri tüketir ve besin kaynağı olarak hizmet veren amino asitler salgılar. Bu amino asitler amino asit türevlerine metabolize edilir ve lizozomla ilişkili bağırsak granüllerinde depolanır.
Sonra, taze tampon ekleyin ve solucanları siyah bir çoklu kuyu test plakasına aktarın.
Her kuyuya kimyasal bir stres indükörü ekleyin ve plakayı kapatın.
Plakayı floresan plaka okuyucuya yerleştirin ve floresansı kaydedin.
Solucanlarda, stres indüktörü oksidatif strese neden olur ve bu da bağırsak epitel hücrelerine zarar verir.
Bu, lizozomla ilişkili bağırsak granüllerinin yırtılmasına ve amino asit türevlerinin salgılanmasına neden olur; bu türevler ultraviyole ışığa maruz kaldığında mavi floresan hale gelir.
Kontrol ve test bakterilerine maruz kalan solucanların floresansını karşılaştırarak bakteri kolonizasyon verimliliğini ve bunların konakçının oksidatif stres yanıtı üzerindeki etkisini değerlendirin.
15 mililitrelik konik tüpte solucan konsantrasyonunu mikrolitre başına 15 solucan olarak ayarlayın. Sonra, çok kanallı pipet veya tekrar pipeti kullanarak sekiz 96 kuyruklu NGM agaroz plakasının her bir kuyusuna 8 mikrolitre solucan çözeltisi aktarın.
36 saat sonra, 96 kuyu plakasının her kuyusuna 30 mikrolitre M9 dağıtın. Sonra, düşük tutumlu uçlarla set düzenlerine göre 384 kuyruklu plakaya solucanları aktarın, böylece plaka okuyucuların doğru şekilde kurulduğundan emin olun. Daha sonra, 384 kuyu plakalarını daha fazla M9 ile doldurarak, termal stres testi için 40 mikrolitre M9 ve TBHP indüklenmiş oksidatif stres için 6 mikrolitre TBHP içinde 34 mikrolitre M9 ekleyerek kuyu başına 60 mikrolitre nihai hacmi hedeflemektir.
Sonra, TBHP eklendikten iki dakika içinde testi başlatın. Sonra, plakaları şeffaf kapaklarıyla kapatın ve 384 kuyruklu plakaların kenarlarını maskeleme bandıyla kapatın, böylece bant kapağın üzerinden veya altına geçmesin. Sonra plakayı plaka okuyucuya yerleştirin.