Bakteriyel Hücrelerle Mikrofluidik Plakanın Hazırlanması

Mikrofluidik kanallarla bağlanmış giriş ve çıkış kuyularından oluşan çift giriş ve çıkış kuyularından oluşan bir mikrofluidik plaka alın; bu kanallar serpantin kanalları ve deneysel bir kanal içerir.

Kanalları astarlamak için, çıktı kuyusuna medya ekleyin.

Plakayı bir plaka aşamasına yerleştirin ve sterilize edilmiş bir kapakla kapatın.

Çıkış kuyusundan giriş kuyusuna medya akışını aktive ederek kanallar içindeki hapsolmuş hava ceplerini temizlemek için kullanılsın.

Tabağı çıkarın. Çıkış kuyusundan kalan ortamı atıp bakteriyel kültür ekleyin.

Giriş kuyusuna, hava geri akışını önlemek için taze ortam ekleyin. Tabağı tekrar sahneye yerleştir.

Mikroskop altında gözlemlerken, hücreleri deneysel kanala çekmek için akışı yeniden başlatın.

Akış hızını ayarlayarak hücrenin serpantin kanallarına girmesini önlemek için tıkanıklığı önleyin.

Akışı durdurun ve bakteriyel bağlanmayı kolaylaştırmak için kuluçka yapın.

Plakayı çıkarın ve kalan bakteriyel kültür ile ortamı atın.

Mikrofluidik plakadaki bakteriler artık daha fazla deney için hazırdır.

Astarlama için, önce ambalajın altındaki cam yüzeye dokunmadan 48 kuyruklu mikrofluidik plakayı çıkarın ve plaka altındaki cam sürgü lens dokusuyla temizleyin. Mikrofluidik kanalları astarlamak için, 37 derece Celsius minimum ortamdan 200 mikrolitre pipetle çıkış kuyusuna kökün, baloncuklardan kaçınmaya özen gösterin. Sonra plakayı plaka aşamasına yerleştirin.

Etanol kuruduktan sonra arayüzü etanol ile silin, plaka aşamasına mühürleyin. Kontrol modülünde manuel modda, sıvıyı Luria-Bertani suyu olarak 37 derece Celsius'ta ve maksimum şeffaflığı santmetrekare başına beş dyne olarak ayarlayın. Çıkış kuyruklarına tıklayarak çıkıştan giriş kuyusuna akışı aktive edin ve kanalları astarlayın.

Beş dakika sonra, tohumlama için akışı durdurun ve tabağı dikkatlice aşamadan çıkarın. Sonra, çıkış kuyusundaki kalıntı ortamı iç çemberden mikrofluidik kanallara giden herhangi bir ortamı çıkarmadan aspire edin. Deneysel kanalları tohumlamak için, giriş kuyusuna 300 mikrolitre minimal ortam eklenir, ardından çıkış kuyusuna 300 mikrolitre bakteriyel kültür eklenir.

Plakayı görüntüleme aşamasına geri getirin, arayüzü etanol ile sildiğinizden emin olun ve plakaya yerleştirmeden önce canlı kamera görüntüsünü tek bir kanala odaklanın. Canlı akışı görsel olarak izlerken, akışı yaklaşık 2 ila 4 saniye boyunca 1 ila 2 dyne ile santimetrekare başına devam ettirin; böylece hücreler deneysel kanala girebilir ancak yılan kanallarına girmez ve hücrelerin bağlanması için plakayı sıcaklık kontrollü aşamada bir saat boyunca bırakın. Yapışma süresinin sonunda, plakayı dikkatlice aşamadan çıkarın ve kanalı rahatsız etmeden bakterileri çıkış kuyusundan aspire edin.

Sonra, giriş yuvalarından ortamı çıkarmak için yeni bir pipet ucu kullanın.