Apoplastik bakterilerin şırınga bazlı basınç yöntemiyle ekstraksiyonu
JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Mikrobiyoloji
0 görüntülenme • 2:28 dk. • November 28th, 2025
Bitkiler-mikrop etkileşimlerini incelemek için yaprakları önceden bakteriyle aşılanmış bir Arabidopsis bitkisini alın.
Bu bakteriler, bitki hücreleri arasındaki hücrelerarası boşluk olan apoplastda çok çoğalır ve mikrokoloniler oluşturur.
Apoplastik kolonizasyon kurulduktan sonra, yaprakları kesin ve iğnesiz bir şırıngaya yerleştirin.
Dokuyu kapatmak için damıtılmış su ekleyin.
Pistonu takın, sonra şırıngayı dik tutun, dokunun ve tısbağa hapsolan havayı boşaltmak için pistonu ayarlayın.
Ucu parafilm ile kapatarak apoplast çıkarımı için kapalı bir oda oluşturun.
Pistonu doku koyulaşana kadar iterek pozitif basınç uygulayın; bu da bakterileri çıkarmak için hücre arası boşluklara sıkıştırma ve suyun girdiğini gösterir.
Sonra, pistonu çekerek negatif basınç uygulayarak doku matriksini genişletin ve sıvı ile bakterileri çekin.
Basınç döngülerini tekrarlayarak mikrokolonileri bozan kesme kuvvetleri oluşturarak bakterileri serbest bırakarak bitki dokusuna zarar vermeden salgılanın.
Şırıngayı açın ve dağılmış bakteriler içeren apoplastik sıvıyı toplayın.
Aşılamadan dört gün sonra, Arabidopsis bitkisinin hava kısmını ya da fasulye bitkisinin aşılanmış yaprağı kesin ve iğnesiz 20 mililitrelik bir şırı
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin