Selüloz Üreten Bakterilerden Bakteriyel Nanoselüloz Pelliküllerinin Hazırlanması

Mannitol içeren besin ortamıyla dolu bir mikroplaka alın.

Her kuyuyu selüloz üreten bir bakteriyle aşılayın ve statik koşullarda kuluçka yapın.

İnkubasyon sırasında bakteriler mannitol alır ve onu glikoza metabolize eder.

Bu glikoz, bakteri zarına gömülü selüloz sentaz komplekslerine taşınır ve glukan zincirlerine polimerize olur.

Bu zincirler hücre dışı uzaya dışarı çıkar ve burada mikrofibrillere kristalleşirler.

Mikrofibriller şerit benzeri yapılara birikerek üç boyutlu bir nanoselüloz matrisi oluşturur.

Daha fazla nanoselüloz üretildikçe, hava-sıvı arayüzünde birikir ve kuyunun şekline şekillendirilmiş jelatinimsi pelliküllere kalınlaşır.

Pellikülleri toplayın ve alkalin bir çözeltide inkübe yapın, bakteri hücrelerini lizize edin, ardından kalan ortamı çıkarın.

Pellicles'i tekrar tekrar suyla durulayın, böylece kalan alkali çözeltiyi ortadan kaldırın. Pellikülleri suda saklayarak susuz kalmayı önleyin. Sonra, sterilliği sağlamak amacıyla buharla sterilize edin.

24 kuyruklu doku kültür plakasının her kuyusuna iki mililitre sıvı kültür ortamı aktarın. Aşılanmış petri kaplarından bir aşılama iğnesi ile iki koloniyi adım adım alıp doku kültür plakasının ilk kuyusuna yerleştirin. Kalan 23 kuyu için aynı işlemi tekrarlayın.

Doku kültür plakasını 30 derece Celsius'ta yedi gün boyunca kuluçka edin. Bu, çapı 16 mm ve kalınlığı yaklaşık 2 ila 3 mm olan toplam 24 BNC pelliklü elde edecektir. BNC pelliküllerini büyüme ortamından toplayın ve 50 derece Celsius'ta bir saat boyunca 200 mililitre sodyum hidroksit çözeltisiyle sterilize ederek tüm G. xylinus'un izlerini çıkarın.

Çözeltiyi atın ve 200 mililitre taze hazırlanmış yüzde 1 sodyum hidroksit çözeltisi ekleyin. Aynı işlemi bir kez daha tekrarlayın veya çözelti içindeki BNC pellikülleri saydam bir görünüm kazanana kadar. BNC pellicle'lerini üç kez suyla durulayın ve oda sıcaklığında yüksek saflıkta suyla saklayın.

BNC pelliküllerinin tamamen suya battığından ve hiçbir zaman kurumasına izin verilmediğinden emin olun. Sonra, BNC pelliküllerini 121 derece Celsius'ta 20 dakika boyunca otoklav edin.