Vejetatif Hücrelerin Hedefli Lizisi ile Çevresel Örnekten Endosporların İzole Edilmesi

Endospor oluşturan bir bakterinin vejetatif hücreleri ve endosporları ile diğer bakterileri içeren çevresel bir örnek alın.

Endosporlar, olumsuz koşullarda hayatta kalmalarına yardımcı olan koruyucu bir örtüye sahiptir.

Vakum filtrasyon ünitesi kullanarak, numuneyi filtreleyerek hücreleri ve endosporları bir zar üzerinde hapseye düşürür.

Zarı bir kaba koyup küçük parçalara kesin.

Parçaları bir tüpe aktarın, bir tampon ekleyin ve tüpü karıştırarak hücreleri ve endosporları serbest bırakın.

Vejetatif hücre yapılarını zayıflatmak için endosporlara zarar vermeden yüksek sıcaklıkta kışkırtma ile kuluçka yapın.

Numuneyi soğutun, sonra lizozim ekleyin ve çaltımarak kuluçka yapın. Lizozim, vejetatif hücrelerin hücre duvarını bozarak onların yırtılmasına neden olur.

Sodyum hidroksit ve bir deterjan ekleyin ve hücresel makromolekülleri ve kalıntıları bozunarak dayanıklı endosporları koruyarak kuluçka yapın.

Endosporları izole etmek için örneği filtreleyin. Endosporları yıkayıp fazla reaktifleri çıkararak daha ileri analiz için hazırlayın.

Filtreleme ünitesi ve vakum pompası metin protokolüne uygun şekilde hazırlandıktan sonra, etanol alevli sterilize edilmiş forseps kullanarak steril nitroselüloz mem