JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Mikrobiyoloji
0 görüntülenme • 1:59 dk. • November 28th, 2025
Besin açısından zengin bir ortamda yetiştirilen patojenik bakteriler olan Vibrio cholerae suşlarının gece boyunca kültürleriyle başlayın.
Kültürleri santrifüjle ederek hücreleri peletleyin. Hücre dışı bileşikler içeren üst sıvıyı çıkarın ve pelleti tuzlu suya bırakın.
Sonra, steril tel aşılajı kültüre batırıp dikey olarak hareketlilik agasına saplayarak bakterileri yüzeyin altına yatmadan biriktirin.
Çapraz kontaminasyonu önlemek için her suş arasında aşılajı alevle sterilize edin.
Plakayı inkubka ederek bakterilerin hareketlilik agar boyunca göç etmesini sağlayın.
Agar, metabolik olarak aktif hücreler tarafından kırmızıya dönen bir redoks göstergesi olan triphenyltetrazolium klorür veya TTC içerir.
Hareketli suşlar, geniş bir alanda TTC'yi azaltır ve büyük kırmızı bir bölge oluştururken, hareketsiz suşlar sadece stab çizgisinde lekelenme gösterir.
Kırmızı bölgelerin büyüklüğü ve yayılımı, her suşun hareketliliğini gösterir.
Gece kültüründen elde edilen hücre pelletini yıkayın. Hareketli agar plakalarını, yıkanmış sıvı kültüre aşılama sapı yerleştirerek ve dikey olarak medyaya saplayarak aşılayın.
Agar'ı bıçaklarken aşılayıcı saplama darbesinin bükülmediğinden emin olun. Her aşı arasında, tel sapını Bunsen brüleri ile sterilize edin. Plakaları kapağı yukarı doğru 14-24 saat boyunca 37 derece Celsius'ta inkübe edin.
14 saat sonra, kültürlerin aşırı büyümesini önlemek için hareketlilik plakalarını yakından takip edin.